Genexpression durch Einzelzell-Elektroporation in hippokampalen Schnittkulturen der Maus
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:33 Min. • August 29th, 2025
Beginnen Sie mit einer Hippocampus-Scheibe aus einem Mäusegehirn, die auf einem Kultureinsatz in einer Schale kultiviert wurde.
Schneiden Sie den Einsatz mit der Scheibe ab und befestigen Sie ihn in einer Elektroporationskammer unter dem Mikroskop.
Perfundieren Sie die Kammer mit einem Puffer, der einen spannungsgesteuerten Natriumkanalblocker enthält, um die Übererregung zu hemmen und zelluläre Toxizität zu verhindern.
Positionieren Sie eine Pipette mit Plasmiden mit dem interessierenden Gen in der Nähe der Schnittscheibe.
Halten Sie den Überdruck aufrecht, um ein Verstopfen der Pipette zu verhindern, während Sie sich einem Ziel-Hippocampus-Neuron nähern, bis sich ein Membrangrübchen bildet.
Schalten Sie auf Unterdruck um, um eine Abdichtung mit der Membran zu erzeugen.
Wechseln Sie zwischen Über- und Unterdruck, um Zellschäden zu minimieren.
Wenden Sie einen Elektroporationsimpuls an, um die Membran vorübergehend zu permeabilisieren und den Plasmideintritt zu erleichtern.
Ziehen Sie die Pipette bei gleichbleibendem Überdruck zurück und wiederholen Sie die Elektroporation für benachbarte Zielneuronen.
Übertragen Sie die elektroporierte Scheibe auf ein frisches Insert und inkubieren Sie es,
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