Injektion von selbstorganisierenden Peptiden und neuralen Vorläuferzellen für die Reparatur des Rückenmarks in einem Rattenmodell

Befestigen Sie eine anästhesierte Ratte mit einer Verletzung des zervikalen Rückenmarks auf einem stereotaktischen Rahmen.

Die Läsionsstelle besteht aus beschädigten Axonen und flüssigkeitsgefüllten Hohlräumen, die von infiltrierten Immunzellen, Gliazellen und Fibroblasten umgeben sind, die das axonale Nachwachsen und die funktionelle Wiederherstellung behindern.

Desinfizieren und inzidieren Sie die Haut oberhalb der Wirbelsäule. Präpariere die Muskeln, um die Dura, die äußere Hülle des Rückenmarks, freizulegen.

Entfernen Sie das Narbengewebe aus der Dura, um die Stelle der Rückenmarksläsion freizulegen.

Positionieren Sie eine Mikrospritze über der Läsion, die selbstorganisierende Peptide (SAPs) enthält, und

injizieren Sie diese in den Läsionskern auf einer Seite der Mittellinie.

Wiederholen Sie die Injektion auf der gegenüberliegenden Seite, um eine gleichmäßige Verteilung zu gewährleisten.

Injizieren Sie als Nächstes neurale Vorläuferzellen (NPCs) an Stellen, die die Läsion umgeben, und vermeiden Sie den entzündeten Läsionskern, um das Überleben der NPCs zu verbessern.

Nach der Injektion ordnen sich die SAPs selbst zu einem Gerüst an, das die extrazelluläre Matrix nachahmt und die Hohlräume überbrückt. Das Gerüst unterstützt das Überleben der NPCs und die Differenzierung in Nervenzellen für den Gewebeumbau.

Die Injektion erfolgt 14 Tage nach einer Rückenmarksverletzung. Bereiten Sie vor Beginn der Operation die SAPs in einer Konzentration von 1 % des Volumens in sterilem Wasser vor und füllen Sie eine 100-Mikrometer-Glaskapillare, die an einer Hamilton-Spritze befestigt ist, mit der Lösung.

Befestigen Sie die Hamilton-Spritze am stereotaktischen Rahmen. Nach der Betäubung der Ratte befestigen Sie den Kopf in den stereotaktischen Rahmen und desinfizieren Sie die Operationsstelle wie zuvor mit Povidon, Jod und 70% Alkohol. Nach dem Öffnen der Haut das Paar der Wirbelmuskulatur erneut vorsichtig präparieren und Retraktoren einsetzen.

Verwenden Sie ein Skalpell mit der Nummer 15, um das Narbengewebe von der Dura zu entfernen und die Läsionsstelle wieder freizulegen. Dann mit der Spitze einer scharfen Nadel die Dura vorsichtig öffnen. Zum Schluss führst du stereotaktisch die Glaskapillare bis zu einer Tiefe von zwei Millimetern in das traumatisierte Rückenmark ein und injizierst die SAPs.

Lassen Sie die Kapillare nach der Injektion der SAPs eine Minute lang an der Injektionsstelle verbleiben, bevor Sie sie entfernen, damit das Gewebe gedehnt werden kann, um die injizierte Lösung aufzunehmen. Wiederholen Sie dann die Injektion an der nächsten Stelle. Hier wurden NPCs aus der paraventrikulären Zone einer adulten roten DS-Maus isoliert und nach zuvor veröffentlichten Verfahren kultiviert.

Kurz vor der Mikroinjektion verdünnen Sie die NPCs in Wachstumsmedium auf eine Konzentration von 50 mal 10 bis zum Drittel lebenden Zellen pro Mikroliter für die Zelltransplantation und laden Sie sie in eine Glaskapillare auf einer Hamilton-Spritze. NPCs werden sofort nach der Injektion von SAPs injiziert. Führen Sie dazu die Glaskapillare der Hamilton-Spritze 0,2 Millimeter rostral der Verletzungsstelle und 1,5 Millimeter unterhalb der dorsalen Oberfläche des Rückenmarks ein.

Injizieren Sie zwei Mikroliter der Zellsuspension mit einer Geschwindigkeit von etwa 0,5 Mikrolitern pro Minute. Lassen Sie die Kapillare nach Abschluss der ersten Injektion wie zuvor eine Minute lang im Rückenmark verbleiben. Ziehen Sie dann die Kapillare zurück, bewegen Sie sie an eine benachbarte Stelle und wiederholen Sie den Injektionsvorgang. Nachdem Sie wie zuvor eine Minute gewartet haben, ziehen Sie die Kapillare zurück und bewegen Sie sie zwei Millimeter weit zur Verletzungsstelle.

Führen Sie an dieser Stelle zwei Zwei-Mikroliter-Injektionen durch.