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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:25 Min. • August 29th, 2025
Beginnen Sie mit pathogenen Bakterienstämmen, die auf separaten Agarplatten kultiviert werden.
Jeder Stamm trägt unterschiedliche Mutationen in Genen, die für die Produktion einer Kapsel, einer schützenden Polysaccharidschicht, verantwortlich sind.
Einzelne Kolonien von den Platten in separate Röhrchen mit einem nährstoffreichen flüssigen Medium überführen und inkubieren.
Während der Inkubation treten die Bakterien in die exponentielle Wachstumsphase ein und exprimieren die kapselproduzierenden Gene.
Mutationen in diesen Genen führen zu Schwankungen in der Kapselproduktion, wodurch nicht verkapselte, schwach verkapselte und stark verkapselte Zellen entstehen.
Übertragen Sie die Kulturen und zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren.
Nicht verkapselte und schwach verkapselte Zellen bilden dichte Pellets, während stark verkapselte Zellen
aufgrund ihrer hydratisierten Kapselschicht ein weniger dichtes Pellet bilden.
Entfernen Sie vorsichtig den Überstand, um einen Verlust der stark verkapselten Zellen zu vermeiden.
Fügen Sie einen Puffer hinzu, zentrifugieren Sie erneut und verwerfen Sie den Überstand, um das Restmedium zu entfernen.
Resuspendieren Sie die Zellen im Puffer, um die Bakterien zu stabilisieren, ohne weiteres Wachstum zu fördern, wodurch die Kapselstruktur erhalten bleibt.
Wählen Sie eine einzelne Kolonie aus einer Vorratsplatte mit steriler Schlaufe und beimpfen Sie 10 Milliliter einer geeigneten Brühe.
Inkubieren Sie die Kultur über Nacht. Dann die Kultur in ein 15-Milliliter-Röhrchen umfüllen und zentrifugieren. Entsorgen Sie als Nächstes den Überstand und suspendieren Sie das Pellet wieder in zwei Millilitern PBS.
Wiederholen Sie die Zentrifugation und verwerfen Sie den resultierenden Überstand. Suspendieren Sie dann das Pellet wieder in zwei Millilitern PBS.