Kultivierung und Isolierung kapselbildender pathogener Bakterienstämme

Beginnen Sie mit pathogenen Bakterienstämmen, die auf separaten Agarplatten kultiviert werden.

Jeder Stamm trägt unterschiedliche Mutationen in Genen, die für die Produktion einer Kapsel, einer schützenden Polysaccharidschicht, verantwortlich sind.

Einzelne Kolonien von den Platten in separate Röhrchen mit einem nährstoffreichen flüssigen Medium überführen und inkubieren.

Während der Inkubation treten die Bakterien in die exponentielle Wachstumsphase ein und exprimieren die kapselproduzierenden Gene.

Mutationen in diesen Genen führen zu Schwankungen in der Kapselproduktion, wodurch nicht verkapselte, schwach verkapselte und stark verkapselte Zellen entstehen.

Übertragen Sie die Kulturen und zentrifugieren Sie, um die Zellen zu pelletieren.

Nicht verkapselte und schwach verkapselte Zellen bilden dichte Pellets, während stark verkapselte Zellen

aufgrund ihrer hydratisierten Kapselschicht ein weniger dichtes Pellet bilden.

Entfernen Sie vorsichtig den Überstand, um einen Verlust der stark verkapselten Zellen zu vermeiden.

Fügen Sie einen Puffer hinzu, zentrifugieren Sie erneut und verwerfen Sie den Überstand, um das Restmedium zu entfernen.

Resuspendieren Sie die Zellen im Puffer, um die Bakte