Trennung der Bakterien nach Kapselmenge unter Verwendung eines diskontinuierlichen Dichtegradienten

Beginnen Sie mit einem Röhrchen mit einem voreingestellten diskontinuierlichen Dichtegradienten, hergestellt aus ungiftigen kolloidalen Kieselsäurepartikeln, die mit Polyvinylpyrrolidon beschichtet sind.

Der Gradient besteht aus drei nicht überlappenden Schichten, die in der Reihenfolge zunehmender Dichten von oben nach unten angeordnet sind.

Nehmen wir eine bakterielle Transposon-Mutantenbibliothek, eine gepoolte Suspension von Bakterienstämmen mit zufälligen Transposon-induzierten Mutationen.

Eine Untergruppe dieser Mutationen stört Gene, die die Kapsel regulieren, eine Polysaccharidschicht, die die bakterielle Zellwand umgibt, was zu Stämmen mit unterschiedlichen Kapselmengen führt.

Fügen Sie die Bakterienbibliothek sehr langsam an den oberen Rand des Gradienten ein, ohne die Schnittstelle zu vermischen.

Zentrifugieren Sie das Röhrchen bei mäßiger Geschwindigkeit.

Der Gradient erleichtert die unterschiedliche Migration von Bakterien anhand ihrer Kapselmengen.

Hyperverkapselte Stämme, die aufgrund ihrer hydratisierten Polysaccharidschicht weniger dicht sind, lokalisieren sich in der Nähe der Spitze.

Schwach verkapselte Stämme siedeln sich in der Mitte an, und nicht verkapselte, dichtere