Isolierung und Anreicherung von extrazellulären Vesikeln aus der äußeren Membran aus Bakterien

Beginnen Sie damit, eine Kolonie gentechnisch veränderter Bakterien in ein flüssiges Medium zu impfen.

Diese Bakterien exprimieren in der äußeren Membran ein fluoreszierendes Fusionsprotein, eine äußere Schutzschicht.

Inkubieren Sie, damit die Bakterien extrazelluläre Vesikel (EVs) freisetzen, membrangebundene Nanostrukturen, die an der interzellulären Kommunikation beteiligt sind und das fluoreszierende Protein enthalten.

Übertragen Sie die Kultur in eine Flasche und zentrifugieren Sie sie bei niedriger Geschwindigkeit, um die Zellen zu pelletieren.

Übertragen Sie den Überstand, der EVs, zelluläre Proteine und Zelltrümmer enthält. Zentrifugieren Sie bei hoher Geschwindigkeit und entfernen Sie den Überstand, der Schmutz enthält.

Filtern Sie den Überstand durch eine Membran, um verbleibende Bakterien und Ablagerungen zu entfernen.

Beimpfen Sie eine Probe auf Agar und inkubieren Sie sie. Die fehlende Bildung von Bakterienkolonien bestätigt die Abwesenheit von Bakterien.

Übertragen Sie die Lösung in ein Ultrafiltrationsgerät mit einer semipermeablen Membran und einer Zentrifuge, um die EVs einzufangen und gleichzeitig kleinere Proteine zu eliminieren.

Sammeln Sie die konzentrierten EVs in ein