Bewertung der Pneumokokken-Adhäsion an primäre humane Endothelzellen unter konstantem Medienfluss

Legen Sie einen mit Gelatine beschichteten Objektträger, der an eine mikrofluidische Pumpe angeschlossen ist, auf einen Mikroskoptisch.

Der Objektträger enthält primäre humane Endothelzellen, die unter fließenden Medien kultiviert wurden, mit Strings des von-Willebrand-Faktors oder VWF, einem Glykoprotein, auf der Zelloberfläche.

Diese Fäden werden durch die Stimulation der Zellen mit Histamin erzeugt.

Der kontrollierte Medienfluss, der durch die mikrofluidische Pumpe appliziert wird, fördert die VWF-Sekretion und das Abwickeln. Dadurch werden bestimmte Bindungsdomänen für die VWF-Zeichenfolgen verfügbar gemacht.

Stoppen Sie den Medienfluss, fügen Sie einen grünen Fluorophor-konjugierten VWF-spezifischen Antikörper hinzu und setzen Sie den Fluss fort, um die Strings mit dem Antikörper zu markieren.

Unterbrechen Sie den Medienfluss und führen Sie rot fluoreszierende Protein-exprimierende Pneumokokken-Bakterien ein.

Starten Sie den Fluss neu, um die Bakterien zu verteilen und die Anheftung an die exponierten Domänen durch Oberflächenadhäsine zu ermöglichen.

Visualisieren Sie mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie die Bindung von Bakterien an die Fäden in Echtzeit.

Stoppen Sie den Medienfluss u