Verfolgung der bakteriellen Infektionsdynamik in einer Maus mit Hilfe von Biolumineszenz
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:35 Min. • September 26th, 2025
Beginnen Sie mit einer Suspension eines abgeschwächten Stammes eines pathogenen Bakteriums.
Der abgeschwächte Stamm weist eine verminderte Pathogenität aufgrund gezielter Deletionen in Virulenzgenen auf.
Die Bakterien sind chromosomal mit einem biolumineszierenden Operon markiert, das eine autonome Lichtproduktion ermöglicht.
Die Bakterien exprimieren das biolumineszierende Operon und produzieren ein Luciferase-Enzym und einen Enzymkomplex, der das Luciferase-Substrat synthetisiert.
Luciferase oxidiert das Substrat, um sichtbares Licht zu erzeugen.
Die Suspension wird zentrifugiert und der Überstand wird verworfen.
Waschen Sie die Zellen mit einem Puffer, zentrifugieren Sie erneut und entsorgen Sie den Überstand, um die verbleibenden nicht-zellulären Bestandteile zu entfernen.
Suspendieren Sie die Zellen im Puffer, um eine optimale Bakterienkonzentration zu erreichen, und ziehen Sie die Suspension in eine Spritze.
Injizieren Sie die Suspension intraperitoneal in eine Maus und überführen Sie sie dann in einen Käfig.
Visualisieren Sie das Biolumineszenzsignal in regelmäßigen Abständen.
Der abgeschwächte Stamm bleibt lokalisiert, und die Biolumineszenz nimmt allmählich ab, was auf eine Abklinge
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