Aufbereitung von E. coli Sphäroplasten
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 4:30 Min. • September 26th, 2025
Nehmen Sie eine E. coli-Kultur .
Verdünnen Sie die Kultur in frischen Medien und inkubieren Sie sie, um die bakterielle Teilung zu fördern.
Als nächstes wird die Kultur in Medien verdünnt, die einen bakteriellen Teilungshemmer enthalten, und inkubiert.
Die Bakterien wachsen weiter, ohne sich zu teilen, und bilden längliche Filamente.
Übertragen Sie die Kultur in ein frisches Röhrchen, zentrifugieren Sie dann, um die Filamente zu pelletieren und den Überstand zu entfernen.
Waschen Sie das Pellet mit einem osmotischen Stabilisator, um eine Sphäroplastenlyse zu verhindern. Entfernen Sie die Lösung.
Fügen Sie nacheinander Puffer, Lysozym, DNase und einen Chelatbildner hinzu. Ausbrüten.
Der Chelatbildner destabilisiert die äußere Membran des Filaments.
Lysozym baut die freiliegende Peptidoglycanschicht ab, wodurch die Filamente ihre Form verlieren und kugelförmige Strukturen bilden, die als Sphäroplasten bezeichnet werden.
Darüber hinaus baut DNase kontaminierende DNA ab, die aus beschädigten Filamenten freigesetzt wird.
Den osmotischen Stabilisator erneut hinzufügen, mischen und inkubieren.
Die Suspension in ein Röhrchen mit Puffer und Zentrifuge überführen.
Entfernen Sie überschüssigen Überstand
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