Expression des Lumineszenz-Operons in marinen biolumineszierenden Bakterien

Beginnen Sie mit einem marinen biolumineszenten Bakterienstamm, der das Lumineszenz-Operon trägt, das für Luciferase und Enzyme kodiert, die für die Substratsynthese benötigt werden.

Streichen Sie den Stamm auf eine nährstoffreiche Agarplatte, die mit künstlichem Meerwasser ergänzt wird, um den nativen Salzgehalt nachzuahmen und das Wachstum zu unterstützen.

Inkubieren, um diskrete Kolonien zu erhalten, dann eine einzelne Kolonie isolieren und in flüssiges Medium mit künstlichem Meerwasser impfen.

Inkubieren Sie mit Rührwerk, um das Wachstum über Nacht in der exponentiellen Phase zu fördern.

Übertragen Sie ein definiertes Volumen der Übernachtkultur in frisches Medium und inkubieren Sie es, um die Bakteriendichte zu erhöhen.

Wenn die Population wächst, setzen Bakterien Autoinduktoren frei, Signalmoleküle, die sich ansammeln und in Zellen diffundieren, wo sie an intrazelluläre Rezeptoren binden und das Lumineszenzoperon aktivieren.

Diese Aktivierung induziert die Luciferase-Expression und die Biosynthese des Substrats.

Luciferase katalysiert die Substratoxidation und emittiert blau-grünes Licht.

Überwachen Sie die Kultur auf Biolumineszenz als Indikator für die Aktivierung des Lumineszenz-Operons und die Lichtemission in Meeresbakterien.

Nach der Aufbereitung des Mediums gemäß dem Textprotokoll werden die bakteriellen biolumineszierenden Stämme auf Agarplatten mit künstlichem Meerwassermedium gestreift und über Nacht bei 24 bis 30 Grad Celsius inkubiert.

Bereiten Sie eine Übernachtkultur vor, indem Sie 100 Milliliter künstliches Meerwassermedium mit einer einzigen Kolonie von der Platte beimpfen. Dann wird die Kultur über Nacht bei 24 bis 30 Grad Celsius und 120 U/min inkubiert. Am nächsten Tag beimpfen Sie 800 Milliliter künstliches Meerwassermedium mit 8 Millilitern Übernachtkultur.

Inkubieren Sie die Bakterienzellen bei 24 bis 30 Grad Celsius und 120 U/min und beobachten Sie die Zellen, bis sie zu glänzen beginnen.