F Plasmidtransfer und duale Antibiotikaauswahl in E. coli
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:30 Min. • September 26th, 2025
Beginnen wir mit Spenderzellen von E. coli , die ein F-Plasmid tragen, bei dem ein Transfergen durch ein Antibiotikaresistenzgen ersetzt wird.
Diese Zellen enthalten auch ein Rettungsplasmid, das für das fehlende Transfergen kodiert.
Nehmen Sie die gleichen Mengen von Empfängerzellen von E. coli mit einem unterschiedlichen Antibiotikaresistenzgen in ihrer DNA.
Beide Kulturen werden in antibiotikafreien Nährmedien gemischt und ohne Schütteln inkubiert.
Das Rettungsplasmid des Spenderbakteriums exprimiert das Transfergen, so dass die Spenderzelle einen F-Pilus bilden kann.
Der Pilus bildet eine Brücke zwischen zwei Zellen, die einen unidirektionalen Plasmidtransfer vom Spender zum Empfänger ermöglicht und Transkonjugate bildet.
Wirbeln Sie die Mischung vor, um Paarungspaare zu stören, und legen Sie sie auf Eis, um eine weitere Paarung zu verhindern.
Die Kultur wird auf Agarplatten mit transkonjuganten, selektierbaren Antibiotika aufgefüllt und inkubiert.
Die Transkonjuganten, die beide Antibiotikaresistenzgene tragen, überleben und bilden Kolonien in Gegenwart beider Antibiotika, was den erfolgreichen Transfer von F-Plasmiden bestätigt.
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