Bakterieller Biosensor-Assay zum Nachweis von bioverfügbarem Quecksilber unter anaeroben Bedingungen

Beginnen Sie mit einem Assay-Setup, das Fläschchen enthält, die in einer anaeroben Kammer platziert werden.

Jedes Fläschchen enthält Medien, die mit Natriumnitrat, Quecksilberionen und unterschiedlichen Konzentrationen von Magnesiumsulfat angereichert sind.

Drehen Sie das Setup, um die Komponenten zu mischen, und inkubieren Sie es dann.

Während der Inkubation fördert Magnesiumsulfat die Bildung von nicht bioverfügbaren Quecksilberkomplexen, indem es freie, bioverfügbare Quecksilberionen konzentrationsabhängig reduziert.

Fügen Sie als nächstes induzierte Biosensoren hinzu, gentechnisch veränderte Bakterien, die ein Plasmid tragen, und mischen Sie.

Das Plasmid enthält einen Quecksilber-responsiven Transkriptionsregulator und einen Promotor, der mit einem fluoreszierenden Reportergen verbunden ist.

Unter anaeroben Bedingungen nutzen die Bakterien Nitrat für die Atmung.

Freie Quecksilberionen dringen in die Zellen ein, binden den Transkriptionsregulator und aktivieren das fluoreszierende Gen, wodurch fluoreszierende Proteine entstehen.

Übertragen Sie die Aliquote aus jedem Fläschchen in eine Multi-Well-Platte.

Messen Sie mit einem Plattenleser die Fluoreszenzintensität.

Eine Abnahme der Fluoresz