Mikrofluidische Zeitraffermikroskopie zur Untersuchung der Antibiotika-Persistenz in Bakterien

Beginnen Sie mit exponentiell wachsenden Bakterienzellen, die ein fluoreszenzmarkiertes DNA-bindendes Fusionsprotein exprimieren, um das Nukleoid sichtbar zu machen.

Geben Sie die Zellen in die Zelleinlässe einer vorbereiteten mikrofluidischen Platte.

Führen Sie anschließend antibiotikahaltige Medien und antibiotikafreie Medien in separate Lösungseinlässe ein.

Versiegeln Sie die Platte, montieren Sie sie auf den Mikroskoptisch und starten Sie die Zeitrafferaufnahme.

Laden Sie zunächst die Zellen in die Kulturkammer.

Perfundierten Sie dann antibiotikafreie Medien in die Kammer, um das exponentielle Zellwachstum zu unterstützen.

Führen Sie abschließend die antibiotikahaltigen Medien ein.

Das Antibiotikum induziert Doppelstrang-DNA-Brüche und tötet anfällige Zellen ab. Diese Zellen weisen kompakte, nicht replizierende Nukleoide mit stabiler Fluoreszenz auf.

Wechseln Sie zurück zu antibiotikafreien Medien, um die Genesung zu fördern.

Persisterzellen - eine kleine Subpopulation, die eine Antibiotikabehandlung überlebt - setzen die DNA-Replikation fort, verlängern sich und teilen sich.

Diese Rückgewinnung führt zu einer erhöhten Fluoreszenz in Persisterzellen, wodurch sie visuell von anfälligen Ze