Hochdurchsatz-Fluoreszenzanalyse zur Untersuchung von Mikrobe-Wurm-Interaktionen

Beginnen Sie mit einer Röhre mit C. elegans-Würmern .

Übertragen Sie die Würmer auf eine Mehrfachbrunnenplatte mit nährstoffreichem Agarosemedium, das entweder die Kontrollbakterien oder die Testbakterien enthält.

Während der Brutzeit nehmen die Würmer Bakterien auf, die das Darmepithel besiedeln und Aminosäuren freisetzen, die als Nährstoffquelle dienen. Diese Aminosäuren werden zu Aminosäurederivaten verwechselt und in lysosombezogenen Darmgranulaten gespeichert.

Als Nächstes wird frischer Puffer hinzugefügt und die Würmer auf eine schwarze Mehrfach-Prüfplatte übertragen.

Fügen Sie jedem Brunnen einen chemischen Spannungseinlöser hinzu und versiegeln Sie die Platte.

Setzen Sie die Platte in einen Fluoreszenzplattenmesser und nehmen Sie die Fluoreszenz auf.

Bei Würmern verursacht der Stressauslöser oxidativen Stress, der die Darmepithelzellen schädigt.

Dadurch platzen die lysosombezogenen Darmgranula, wodurch Aminosäurederivate freigesetzt werden, die bei UV-Licht blau fluoreszieren.

Vergleichen Sie die Fluoreszenz von Würmern, die den Kontrollbakterien ausgesetzt sind, und testen Sie die Effizienz, um die Kolonisierungseffizienz von Bakterien und deren Einfluss auf die oxidative Stressre