JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:08 Min. • November 28th, 2025
Beginnen Sie mit einem gefrorenen Bakterienlager.
Verwenden Sie eine sterile Inokulationsschleife, um die gefrorenen Bakterien auf eine Nähragarplatte zu streichen. Inkubieren Sie die umgekehrte Platte, um eine Wasserkondensation auf der Agaroberfläche zu verhindern.
Die Bakterien nutzen die Nährstoffe, wachsen auf der Oberfläche des Agars und bilden deutlich sichtbare Kolonien.
Wähle eine einzelne Kolonie aus und impfe sie in ein flüssiges Medium mit Nährstoffen, um eine reine Kultur zu initiieren.
Inkubieren Sie den Schlauch unter starken Schüttelbedingungen.
Das Schütteln sorgt für die Belüftung im Röhrchen und hält die Zellen schwebend, sodass sie sich nicht am Boden absetzen.
Es sorgt außerdem für eine gleichmäßige Verteilung der Nährstoffe im gesamten Medium und fördert so das exponentielle Bakterienwachstum.
Dies führt zu einer dichten, metabolisch aktiven bakteriellen Suspension.
Die Bakterienkultur im flüssigen Medium ist nun bereit für weitere Experimente.
Um den Bestand mit einer sterilen Inokulationsschleife zu verwenden, entfernt man eine kleine Menge gefrorenes Material und streicht die Bakterien aus, um einzelne Kolonien auf LB-Agarplatten zu erhalten.
Inkubieren Sie die Platten mit der Deckelseite nach unten für 12–16 Stunden bei 37 Grad Celsius. Nehmen Sie vorbereitete Platten. Inokulieren Sie 4 Milliliter flüssige LB-Brühe in einem sterilen 10-Milliliter-Kulturröhrchen mit einer einzelnen Kolonie, indem Sie die Oberfläche der einzelnen Kolonie mit einer sterilisierten Schleife berühren und die Kolonie in die flüssige Brühe übertragen. Anschließend wird die Kultur mit einer Belüftung in einem Shaker-Inkubator bei 225 U/min für 12–16 Stunden bei 37 Grad Celsius belüftet.