Eine synthetische orale Bakteriengemeinschaft simulierten Verdauungsphasen aussetzen

Beginnen Sie mit einem Röhrchen, das eine synthetische Bakteriengemeinschaft enthält, die häufig im menschlichen Mund vorkommt.

Fügen Sie simulierte Speichelflüssigkeit hinzu, die Mucin, ein Glykoprotein und das Enzym α-Amylase enthält, um die orale Umgebung nachzuahmen, und inkubieren Sie dann mit Schütteln.

Die Bakterien interagieren mit Mucin, was die Aggregation fördert, während α-Amylase die enzymatischen Bedingungen des Speichels repliziert.

Nimm eine Probe.

Als Nächstes wird simulierte Magenflüssigkeit mit Schleim mit saurem pH-Wert eingeführt, um die Magenumgebung nachzuahmen, und mit Schütteln inkubiert.

Die sauren Bedingungen töten säureempfindliche Bakterienarten, aber säuretolerante und mucinbeschichtete, leicht säuretolerante Bakterien überleben.

Nimm eine weitere Probe.

Fügen Sie schließlich simulierte Darmflüssigkeit mit Bicarbonat und physiologischen Salzen hinzu. Inkubieren Sie mit Zittern.

Die salzreiche Umgebung induziert Ionenstress, der die bakterielle Membran stört und die Lebensfähigkeit verringert.

Sammeln Sie eine letzte Probe.

Alle drei Post-Simulationsproben sind nun bereit für die Bewertung der bakteriellen Lebensfähigkeit.

Um die orale Verdauung zu simulieren, werden 3 Milliliter der Bakteriengemeinschaft in ein 50-Milliliter-steriles Rohr übertragen und mit 3 Millilitern simulierter Speichelflüssigkeit oder SSF gemischt.

Fügen Sie 75 Einheiten Alpha-Amylase pro Milliliter aus menschlichem Speichel Typ 9A und zwei Gramm Schleim pro Liter aus dem Schweinemagen Typ 2 hinzu. Die Mischung zwei Minuten lang bei 37 Grad Celsius und 100 U/min inkubieren. Nehmen Sie eine 2-Milliliter-Probe zur DNA-Extraktion und zur Quantifizierung der Durchflusszytometrie.

Um die Magenverdauung zu simulieren, fügen Sie 4 Milliliter simulierte Magenflüssigkeit oder SGF zu 3 Millilitern des Bakteriums hinzu. Verwenden Sie einen molaren HCl, um den pH-Wert bei Bedarf auf 3 zu stellen. Inkubieren Sie die Probe bei 37 Grad Celsius und 100 U/min für zwei Minuten.

Dann entnehmen Sie eine 2-Milliliter-Probe. Für die Verdauung des Dünndarms geben Sie den Bakterien 4 Milliliter simulierte Darmflüssigkeit oder SIF zu. Verwenden Sie bei Bedarf Natriumhydroxid, um den pH-Wert anzupassen.

Dann inkubieren Sie die Probe bei 37 Grad Celsius und 100 U/min für zwei Minuten und entnehmen Sie eine 2-Milliliter-Probe.