Transfektion eines induzierbaren Genexpressionssystems in Zellen, die ein bakterielles Effektorprotein exprimieren

Testen Sie menschliche Zellen, die CaeB exprimieren, ein anti-apoptotisches bakterielles Protein.

Nutze Zellen ohne CaeB als Kontrolle.

Einführung eines Transfektionsreagens, das mit einem tetracyclin-induzierbaren Genexpressionssystem komplexiert ist, das sowohl Regulator- als auch Antwortplasmide enthält.

Das Regulator-Plasmid codiert einen transkriptionellen Aktivator und Schalldämpfer, während das Antwortplasmid ein pro-apoptotisches Protein codiert, das von TRE gesteuert wird.

Inkubieren Sie die Zellen, um die Plasmidaufnahme und regulatorische Proteinexpression zu erleichtern.

Ohne Tetracyclin bleibt der Aktivator inaktiv, und der Schalldämpfer unterdrückt die TRE-gesteuerte Transkription.

Fügen Sie ein Tetracyclin-Analogon hinzu und inkubieren Sie.

Das Analogon ermöglicht die Aktivator-TRE-Bindung und initiiert die Expression pro-apoptotischer Proteine.

In Kontrollzellen löst dies die apoptotische Signalübertragung aus und aktiviert einen apoptotischen Marker.

In CaeB-exprimierenden Zellen hemmt CaeB die apoptotische Signalübertragung und reduziert die Markeraktivierung.

Eine reduzierte Markeraktivierung in CaeB-exprimierenden Zellen deutet darauf hin, dass CaeB die Apoptose hemmt.

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