Isolierung von Mausblasenepithelzellen mit intrazellulären Bakteriengemeinschaften

Beginnen Sie mit Blasenepithelzellen, die von einer Mausblase abgeschabt wurden, die mit fluoreszenzmarkiertem uropathogenem E. coli infiziert ist.

Während der Infektion dringen diese Bakterien in Epithelzellen ein und bilden intrazelluläre Bakteriengemeinschaften, sogenannte IBCs – biofilmähnliche Strukturen, die sie vor der Immunabwehr des Wirts schützen.

Unter einem Seziermikroskop werden IBCs als große fluoreszierende Aggregate identifiziert, die in einzelnen Epithelzellen eingeschlossen sind.

Bauen Sie ein Mund-Mikropipettiersystem mit einer gezogenen Glaskapillare zusammen, die mit einer Aspirationspipette verbunden ist, um einzelne IBC-haltige Epithelzellen zu isolieren.

Tauchen Sie die Kapillarspitze kurz in PBS, um die kapillargetriebene Flüssigkeitsaufnahme zu reduzieren.

Positioniere die Kapillare in der Nähe der ausgewählten fluoreszierenden Epithelzelle und sauge sanft ab, um eine einzelne IBC-haltige Zelle anzuziehen, wobei uninfizierte Zellen und extrazelluläre Bakterien vermieden werden.

Stoßen Sie die Zelle mit leichtem Überdruck in ein steriles Mikrozentrifugenrohr aus, wodurch die bakterielle Lebensfähigkeit erhalten bleibt.

Diese Methode ermöglicht die Isolierung von E