JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 1:29 Min. • February 26th, 2026
Beginnen Sie mit einer Immunzellkultur, die mit pathogenen Bakterien infiziert ist, die intrazelluläre Inklusionskörper bilden.
Die bakterielle Infektion beeinträchtigt den Antigenpräsentationsweg in den Immunzellen.
Nimm eine uninfizierte Kultur als Kontrolle.
Als Nächstes gib du ein Modell-Proteinantigen hinzu und inkubiere.
Immunzellen internalisieren, verarbeiten und präsentieren die Modell-antigen-abgeleiteten Peptide auf MHC-I-Molekülen.
Nach der Inkubation werden die Zellen gewaschen, um unverarbeitetes Antigen zu entfernen.
Fixieren Sie die Zellen und fügen Sie dann ein Abschreckmittel hinzu, um das Fixierungsmittel zu neutralisieren.
Führen Sie die entwickelten CD8+ T-Zellen ein und inkubieren Sie.
Diese Zellen erkennen das Antigenfragment auf dem MHC-I-Molekül, werden aktiviert und sezernieren ein Enzym, das als Marker für die Präsentation des MHC-I-vermittelten Antigens dient.
Fügen Sie anschließend ein Substrat hinzu, das mit dem Enzym reagiert und ein kolorimetrisches Signal erzeugt.
Messen Sie die Absorption. Eine reduzierte Absorption in der infizierten Zellkultur im Vergleich zur nicht infizierten Kultur deutet auf eine beeinträchtigte Effizienz der MHC-I-Antigenpräsentation aufgrund bakterieller Infektionen hin.