Beurteilung der Darmpermeabilität bei C. elegans nach bakterieller Exposition

Nimm C. Eleganswürmer , die auf nährstoffreichen Agarplatten mit E. kultiviert wurden. coli für die Kontrollerkrankung und Pseudomonas aeruginosa für die pathogene Erkrankung.

Während der Inkubation ernähren sich die Würmer von Bakterien, die das Darmlumen besiedeln.

In der Kontrolle bleibt das Darmepithel intakt, während die durch den Krankheitserreger freigesetzten Toxine epitheliale Schäden verursachen.

Waschen Sie die Würmer mit einem Puffer und übertragen Sie sie auf Platten, die mit fluoreszierenden Tracern und hitzeinaktivierten Bakterien als Nahrungsquelle ergänzt werden.

Bei der Kontrolle bleiben aufgenommene fluoreszierende Tracer im Darm, während sie bei den pathogen infizierten Würmern das beschädigte Epithel durchqueren und in die Körperhöhle gelangen.

Waschen Sie die Würmer erneut und legen Sie sie auf frische Teller. Dann werden sie auf eine Mehrfach-Assay-Platte übertragen, die ein Fixativ enthält, um die Zellstruktur zu erhalten.

Entferne das Fixativ. Dann füge ein Montagemedium für die Bildgebung hinzu.

Beobachten Sie mit einem Fluoreszenzbildgebungssystem.

Erhöhte Fluoreszenz in der Körperhöhle von P. Aeruginosa-exponierte Würmer deuten auf die durch den Erreger induzier