Quantifizierung enzyminduzierter Biofilmsuppression bei pathogenen Bakterien

Nehmen Sie eine Mikroplatte mit Kontroll- und Behandlungsbrunnen, die jeweils mit einem biofilmbildenden, pathogenen Bakterium impfiert sind.

Die Behandlungsbrunnen enthalten ein Enzym, das die Biofilmbildung stört.

Inkubieren Sie unter mikroanaeroben Bedingungen, um eine sauerstoffarme Umgebung zu schaffen. Dies fördert die Sekretion bakterieller Signalmoleküle, die die Oberflächenadhäsion vermitteln. In den Behandlungsbrunnen baut das Enzym diese Moleküle ab und reduziert so die bakterielle Anhaftung.

Waschen Sie die Brunnen, um nicht haftende Zellen zu entfernen.

Frisches Medium einführen und inkubieren. Die anhaftenden Bakterien vermehren sich und sekretieren extrazelluläre polymere Substanzen, die die Biofilmmatrix bilden.

Entfernen Sie das Medium und waschen Sie die Brunnen.

Fügen Sie einen kationischen Farbstoff hinzu und inkubieren Sie, um die Bindung an negativ geladene Biofilmkomponenten zu ermöglichen.

Waschen, um ungebundene Farbe zu entfernen.

Inkubieren Sie mit einem Lösungsmittel unter Rührung, um den gebundenen Farbstoff in die Lösung freizusetzen.

Messen Sie die optische Dichte oder OD, um die Biofilmbiomasse zu quantifizieren.

Ein niedrigerer OD in den Behandlungsbrunnen sp