Detektion von Saccharibakterien in binärer Kultur mittels Polymerase-Kettenreaktion
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Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:06 Min. • February 26th, 2026
Beginnen Sie mit einer mit Saccharibakterien infizierten Actinomyces-Kultur .
Saccharibacteria, ein ultrakleines parasitäres Bakterium, und sein Wirt bilden eine binäre Kultur.
Fügen Sie ein Aliquot der infizierten Kultur in ein PCR-Rohr mit Amplifikationsreagenzien mit Elektrophorese-Tracking-Farbstoff und Saccharibacteria-spezifischen Primern hinzu.
Setze den Schlauch in einen Thermocycler mit festgelegten PCR-Bedingungen.
Während der ersten Denaturierung wird Saccharibakterien hitzelysiert und genomische DNA freigesetzt. Actinomyces bleiben aufgrund starrer Zellwände intakt, was die Freisetzung von Wirts-DNA einschränkt.
Die Hitze denaturiert dann die DNA-Stränge der Saccharibakterien und aktiviert die Taq-Polymerase.
Während des Annealings binden die Primer an komplementäre Sequenzen im Genom der Saccharibakterien.
Im weiteren Sinne fügt Taq-Polymerase den Primern dNTPs hinzu und synthetisiert so neue DNA-Stränge.
Laden Sie das amplifizierte PCR-Produkt auf ein Agarosegel, das mit einem Farbstoff vorgefärbt ist, der an die DNA-Fragmente bindet.
Führe Elektrophose durch und visualisiere das Gel unter UV-Licht.
Ein Saccharibacteria-spezifisches Ampliconband bestätigt die Wirts-Parasiten-In
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