Detektion von Saccharibakterien in binärer Kultur mittels Polymerase-Kettenreaktion

0 Ansichten2:06 Min. • February 26th, 2026

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Beginnen Sie mit einer mit Saccharibakterien infizierten Actinomyces-Kultur .

Saccharibacteria, ein ultrakleines parasitäres Bakterium, und sein Wirt bilden eine binäre Kultur.

Fügen Sie ein Aliquot der infizierten Kultur in ein PCR-Rohr mit Amplifikationsreagenzien mit Elektrophorese-Tracking-Farbstoff und Saccharibacteria-spezifischen Primern hinzu.

Setze den Schlauch in einen Thermocycler mit festgelegten PCR-Bedingungen.

Während der ersten Denaturierung wird Saccharibakterien hitzelysiert und genomische DNA freigesetzt. Actinomyces bleiben aufgrund starrer Zellwände intakt, was die Freisetzung von Wirts-DNA einschränkt.

Die Hitze denaturiert dann die DNA-Stränge der Saccharibakterien und aktiviert die Taq-Polymerase.

Während des Annealings binden die Primer an komplementäre Sequenzen im Genom der Saccharibakterien.

Im weiteren Sinne fügt Taq-Polymerase den Primern dNTPs hinzu und synthetisiert so neue DNA-Stränge.

Laden Sie das amplifizierte PCR-Produkt auf ein Agarosegel, das mit einem Farbstoff vorgefärbt ist, der an die DNA-Fragmente bindet.

Führe Elektrophose durch und visualisiere das Gel unter UV-Licht.

Ein Saccharibacteria-spezifisches Ampliconband bestätigt die Wirts-Parasiten-Interaktion in der binären Kultur.

Aliquot 24 Mikroliter des PCR-Masters mischen sich in ein 0,2-Milliliter-PCR-Rohr. Mit einem Mikroliter Saccharibakterien-Kultur infiziert und den Tub in einen Thermocycler einsetzen.

Stellen Sie das PCR-Programm wie im Textmanuskript beschrieben ein. Laden Sie die PCR-Produkte mit einem 1%igen Agros-Gel ein und führen Sie es durch. Ein Band von etwa 600 Basen bestätigt das Vorhandensein von Saccharibakterien.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026