JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:54 Min. • February 26th, 2026
Nehmen Sie narkosierte Wildtyp-Zebrafische und immungeschwächte Zebrafische ohne Lymphozyten.
Setzen Sie jeden Fisch mit der Bauchseite nach oben in einen Schlitz, der in einen feuchten Schwamm geschnitten ist, um die Lebensfähigkeit zu erhalten.
Injizieren Sie Mycobacterium marinum in die Bauchhöhle, um eine systemische Infektion zu etablieren, die menschliche Tuberkulose modelliert.
Nach der Injektion werden die Fische zur Rettung in Frischbeckenwasser überführt und überwacht.
Beim Wildtyp-Fisch bildet eine Entzündungsreaktion ein Granulom, das aus Bakterien, infizierten Makrophagen und Lymphozyten besteht. Das Granulom enthält die Bakterien und verhindert ihre Ausbreitung.
Lymphozyten produzieren Zytokine, die die antimikrobielle Funktion der Makrophagen verstärken und so die Bakterienabtötung ermöglichen.
Bei immungeschwächten Fischen fehlen dem Granulom die Lymphozyten. Dadurch bleiben Makrophagen teilweise aktiviert, sodass die Bakterien überleben, sich vermehren und sich ausbreiten können, was zum Fischsterben führt.
Erstellen Sie ein Überlebensdiagramm. Die hohe Sterblichkeit bei immungeschwächten Fischen unterstreicht die Rolle der Lymphozyten bei der Kontrolle der Infektion.
Zuerst pipettieren Sie einen 5-Mikroliter-Tröpfchen der verdünnten bakteriellen Lösung auf ein Stück Paraffinfilm. Dann zieht man den Tröpfchen in eine 30-Gauge-Insulinnadel.
Verwenden Sie für dieses Experiment einen fünf bis acht Monate alten Fisch, wobei einer ein Wildtypfisch und der andere ein Lumpenmutantenfisch ist. Positionieren Sie diese Fische mit der Bauchseite nach oben in den Schlitzen eines Stücks feuchten, schaumigen Plastiks. Injizieren Sie die Insulinnadel zwischen die Bauchflossen in einem 45-Grad-Winkel.
Lassen Sie die Nadel nach oben öffnen, damit die gesamte Öffnung im Bauchraum liegt. Dann injiziert man langsam die bakterielle Lösung. Danach entferne die Nadel vorsichtig und übertrage die Fische sofort in ein Rettungsbecken mit frischem Beckenwasser.
Entnehmen Sie alle 15 Minuten Proben vom verwendeten bakteriellen Aliquot auf 7H10-Tellern. Inkubieren Sie diese Proben fünf Tage lang bei 29 Grad Celsius, um die Infektionsdosis zu überprüfen. Überprüfen Sie regelmäßig das Wohlbefinden der Fische und achten Sie darauf, alle Fische mit Infektionssymptomen durch Inkubation in Wasser mit mehr als 0,02 % des 3-Aminobenzoesäure-Ethylesters zu euthanadieren.