Fluoreszenzbildgebung der bakteriellen Besiedlung im Nierengewebe der Maus
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Mikrobiologie
0 Aufrufe • 2:43 Min. • March 31st, 2026
Beginnen Sie mit einer Mausniere, die mit manipulierten Gram-positiven Bakterien infiziert ist, die das Gewebe besiedeln und Läsionen bilden.
Alle bakteriellen Zellen exprimieren rote Fluoreszenz, während läsion-spezifische Wirtsbedingungen die Expression von grünem fluoreszierendem Protein in bestimmten Zellen ermöglichen.
Behandeln Sie die Niere mit einem Fixativ und inkubieren Sie im Dunkeln, um die Gewebestruktur zu erhalten und die Zellmembranen teilweise zu permeabilisieren.
Das Organ in ein geeignetes Medium einbetten, einfrieren und in dünne Gewebescheiben aufteilen.
Legen Sie die Scheibe auf einen geladenen Glasträger zur Haftung.
Färben Sie das Gewebe mit einem nuklearen Farbstoff.
Der Farbstoff dringt in Wirts- und Bakterienzellen ein und bindet an die DNA.
Legen Sie einen Deckmantel über das Gewebe und betrachten Sie den Objektträger unter einem Fluoreszenzmikroskop mit speziellen Bildgebungskanälen.
Die nukleare Färbung zeichnet die Wirts- und Bakterien-DNA ab.
Alle Bakterien im Gewebe zeigen rote Fluoreszenz, während die grüne Fluoreszenzexpression den Ort der Wirts-Pathogen-Interaktion anzeigt.
Am geeigneten experimentellen Endpunkt entnehmen Sie Niere, Herz, Leber, Lunge und
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