Akuter Myokardinfarkt bei Ratten

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den akuten Myokardinfarkt bei Ratten zu modellieren, um die kardialen Signalmechanismen zu untersuchen, die mit der unmittelbaren Reaktion des Myokards auf eine kardiale Ischämie, gefolgt von einer Reperfusionsverletzung, verbunden sind. Zu diesen Reaktionen gehören die Größe des Infarkts, die Risikofläche und der Zelltod. Der erste Schritt besteht darin, den linken Ventrikel freizulegen, indem ein kleiner Schnitt am vierten Interkostalraum der linken Seite des Brustkorbs gemacht und die Rippen nach der Isolierung gespreizt werden.

Die linke anteriore absteigende Arterie oder LAD wird nach der ischämischen Periode 30 Minuten lang vorübergehend ligiert. Die Ligatur des LAD wird gelöst, so dass nach einer vierstündigen Reperfusionsperiode eine kardiale Reperfusion möglich ist. Das LAD wird vor der Exzidierung des Herzens noch einmal ligiert und auf die Größe des infarktierten Myokardbereichs mit und ohne Risiko untersucht.

Letztlich ergeben sich Ergebnisse aus der histologischen Beurteilung des Infarkts. Das Myokard kann verwendet werden, um therapeutische Strategien zur Behandlung von Herzinsuffizienz zu erforschen. Diese Technik kann Einblicke in die Signalmechanismen geben, die mit den unmittelbaren Reaktionen auf Ischämie verbunden sind, gefolgt von kompetenten Verletzungen wie Infarktgröße, Risikobereich und Zelltod.

Dieses Modell kann verwendet werden, um neue therapeutische Strategien für die Behandlung von ischämischen Herzkrankheiten zu evaluieren. Das Verfahren wird von einem leitenden wissenschaftlichen Mitarbeiter und X, einem leitenden Postdoktoranden aus dem Labor von Dr. Bradley McConnell in der Abteilung für Pharmakologische und Pharmazeutische Wissenschaften an der University of Houston, einem institutionellen Mitglied des Texas Medical Center, demonstriert. Bevor der chirurgische Eingriff beginnen kann, muss die Operationsfläche mit 70%igem Ethanol desinfiziert werden.

Sterilisieren Sie alle chirurgischen Instrumente vor jeder einzelnen Operation mit einem Heißperlensterilisator. Zu den erforderlichen Instrumenten gehören zwei chirurgische Scheren, eine Pinzette, eine gebogene Pinzette, zwei Nadelhalter und ein Brustretraktor. Stellen Sie die Temperatur des homöo-themischen Deckensystems so ein, dass die Körpertemperatur des Tieres bei 37 plus oder minus einem Grad Celsius bleibt.

Die Größe eines Infarkts hängt sowohl von der Dauer des Verschlusses als auch von der Körpertemperatur ab. Halten Sie Baumwollgaze und Applikatoren bereit, um Blutungen zu behandeln. In diesen Studien werden nur Tiere verwendet, die eine körperliche Untersuchung durch visuelle Inspektion, Messung der Herzfrequenz, der Atemfrequenz, der Körpertemperatur und des Körpergewichts bestehen.

Notieren Sie das Gewicht und die Identifizierungsmerkmale gesunder Tiere, die am Tag vor der Operation operiert werden. Verabreichen Sie eine Dosis Buprenorphin-Masken. Kittel und Handschuhe müssen während des gesamten Eingriffs getragen werden, und die Handschuhe müssen zwischen den einzelnen Operationen gewechselt werden.

Zu Beginn betäuben Sie eine Ratte und bereiten Sie die Operationsstelle vor, indem Sie das Fell im Hals- und Brustbereich gründlich rasieren. Desinfizieren Sie die rasierten Stellen mit Betadin-Lösung, gefolgt von 70%igem Ethanol. Wiederholen Sie diesen Vorgang dreimal.

Legen Sie das Tier auf ein homöo-thematisches Deckensystem, um die Körpertemperatur richtig zu halten. Auf der rechten Seite liegend. Das Abschrägen der Ränder eines Polyethylenrohrs erleichtert das Einführen in den Kehlkopf.

Führen Sie den Endotrachealtubus mit Hilfe eines chirurgischen Stereomikroskops ein. Sanftes Manipulieren der Zunge nach Bedarf und dabei die Luftröhre im Blick behalten. Schließen Sie den Endotrachealtubus an ein Beatmungsgerät an, das mit 80 Atemzügen pro Minute und einem Atemzugvolumen von 1,2 Millilitern pro 100 Gramm Körpergewicht fährt.

Sobald die mechanische Beatmung erreicht ist, legen Sie ein steriles Tuch über die Ratte, so dass nur der Operationsbereich freiliegt. Sobald eine gleichmäßige Atmung hergestellt ist, öffnen Sie den Brustkorb am linken vierten Interkostalraum. Minimieren Sie den Grad des Einschneidens in das Gewebe, um das Risiko von Blutungen zu verringern.

Positionieren Sie einen Brustretraktor im vierten Interkostalraum und spreizen Sie die Rippen, um den linken Ventrikel freizulegen, oder es muss darauf geachtet werden, dass die Lunge nicht beschädigt wird. Öffnen Sie anschließend das Perikard und lassen Sie es an Ort und Stelle. Wenn möglich, ist die proximale linke anteriore absteigende Arterie oder die LAD-Arterie mit Hilfe eines chirurgischen Stereomikroskops zu identifizieren.

Vorübergehend, ligate oder binden Sie den LAD mit einem Schlickerknoten, um eine Ischämie auszulösen. Achten Sie darauf, das eigentliche Herz nicht nach außen zu tragen. Die LAD-Ligatur wird durch die Beobachtung des Blanchierens des Myokardgewebes distal der Naht sowie durch die Dysfunktion der Vorderwand während der ischämischen Periode bestätigt.

Beginnen Sie nach einer 30-minütigen ischämischen Periode mit der kardialen Reperfusion, indem Sie die Ligatur um den LAD mit einer mikrochirurgischen Schere durchtrennen oder lösen. Die Reperfusion wird durch die Rückkehr der roten Farbe in das Myokardgewebe und den Nachweis einer gewissen Wiederherstellung der Vorderwandbewegung bestätigt, die unmittelbar nach der Freigabe der LAD-Ligatur beobachtet wurde. Das Verfahren ist für Scheinkontrollratten identisch, mit der Ausnahme, dass der LAD nicht vorübergehend ligiert wird.

Entfernen Sie den Brustretraktor und ziehen Sie die Rippen mit einem unterbrochenen Nahtmuster zusammen. Sobald die Rippen geschlossen sind, erzeugen Sie einen negativen Brustdruck, um eine gute Atmung zu gewährleisten, indem Sie Luft aus der Brusthöhle ansaugen. Zum Schluss verschließen Sie die Haut mit einem kontinuierlichen Nahtmuster. Nach der Operation setzen Sie die Ratte in einen Käfig mit einem Heizkissen und Wasser, überwachen Sie die Körpertemperatur mit einem Rektalthermometer, die Atemfrequenz durch visuelle Inspektion, die Herzfrequenz durch Herzklopfen und abnormale Schmerzerscheinungen, bis das Tier gehfähig wird.

Es sollte sterile Kochsalzlösung verabreicht werden. Wenn Anzeichen einer Dehydration beobachtet werden, verabreichen Sie Buprenorphin unmittelbar nach der Operation. Nach einer vierstündigen Reperfusionsphase setzen Sie die reansthesierte Ratte wieder in den Operationsbereich ein.

Visualisieren Sie den linken Ventrikel wie zuvor gezeigt und ligieren Sie den LADA ein zweites Mal, oder der Slipknot kann neu gebunden werden. Injizieren Sie einen Milliliter 5% Evansblau und Kochsalzlösung in die rechte Ventrikelkammer und lassen Sie sie zwei Minuten lang perfundieren. Injizieren Sie nach dieser Zeit einen Milliliter gesättigte Kaliumchloridlösung in die rechtsventrikuläre Kammer, um zu verhindern, dass das Herz schnell schlägt, schneiden Sie das Herz heraus und betten Sie es in erwärmte 2%ige Agrophosphat-gepufferte Kochsalzlösung ein.

Sobald das Agro bei Raumtemperatur erstarrt ist, schneiden Sie das Herz in ein bis zwei Millimeter große Abschnitte. Färben Sie das lebensfähige Myokard 20 Minuten lang mit 2 %-Trien-Tetraoleumchlorid oder TTC und nehmen Sie ein Bild von jeder gesehenen Scheibe auf. Hier ist ein repräsentatives Bild des Rattenherzens.

Nach vierstündiger Reperfusion stellt der blaue Bereich den nicht verschlossenen oder nicht gefährdeten perfundierten Bereich dar. Die roten Bereiche zeigen das Infarktrisikogebiet und die weißen, gelben Bereiche das infarzierte Myokard innerhalb des Risikobereichs. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie bei akutem Myokardinfarkt bei Ratten und Tiermodellen abschneiden, die zur Nachahmung der ischämischen Herzkrankheit beim Menschen verwendet werden.

Dieses Modell kann verwendet werden, um die unmittelbaren Reaktionen auf eine Ischämie zu untersuchen, gefolgt von einer Reperfusionsverletzung, die innerhalb der ersten Stunden auftritt, wie z. B. die Infarktgröße, das Flächenrisiko und den Zelltod. Wie Sie in diesem Video sehen, viel Glück bei Ihren Experimenten.