Name: Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung von Maus-Trachealepithelzellen und deren Kultivierung an der Luft-Flüssig-Grenzfläche zur Untersuchung von Zigarettenrauchtoxizität. Dieses Protokoll ermöglicht die Analyse zellulärer Schädigungsmechanismen.

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Wir danken Emeka Ifedigbo für technische Unterstützung und Dr. Shivraj Tyagi für wertvolles Know-how. Wir danken auch der Harvard NeuroDiscovery Zentrum für Unterstützung bei der Mikroskopie. Diese Arbeit wurde teilweise durch eine American Heart Association Predoctoral gewähren 09PRE2250120 zu Hilaire Lam, und NIH Zuschüsse, R01-HL60234, R01-HL55330, R01-HL079904, verliehen an AMK Choi unterstützt.

Die gesamte Protokoll benötigt 2 Tage für Zell-Isolierungen aus tierischem Gewebe, 5-10 Tage für die Zell-Proliferation und eine zusätzliche 10-14 Tage für die Zelldifferenzierung bei Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche. Ein weiterer Tag ist für die Zelle Engagements und der Ernte von Proben erforderlich. 1. Isolierung von Maus Tracheobronchial Epithelzellen (MTEC). Hinweis: Alle nachfolgend beschriebenen Verfahren wurden überprüft und genehmigt von der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss am Brigham and Womens Hospital / Harvard Medical School Area. Bevor Sie beginnen: <ul><li> Bereiten Ham 's F12 Medien mit Antibiotika. Bis 250 ml Hams F12 Basalmedien (CellGro) add 2,50 ml einer 100 X Penicillin / Streptomycin (10 2 U/mL-10 2 mg / mL) Lösung und 250 mL einer 1000 X Fungizone Lösung. Lagerung bei 4 ° C für bis zu 4 Wochen. </li><li> Bereiten Sie eine Lösung von 0,15% Pronase. Add 15 mg Pronase bis 10 ml Hams F12 Medien mit Antibiotika. Machen Sie frisch und halten auf Eis bis zum Gebrauch. </li><li> Bereiten Sie eine saubere Arbeitsfläche und sterile OP-Instrumente geeignet für Kleintier-Chirurgie, und eine lamellare Gewebekultur Haube für die Zell-Isolierungen. Alle anderen Geräte gilt als Standard für die tierische Zellkultur einschließlich befeuchteten CO 2-Inkubatoren, kalten Raum, Tisch-Zell-Zentrifugen, das inverse Mikroskop und Einweg-Kunststoff-Pipette und Kultur ware. </li><li> Bereiten Kollagen I-Lösung (50 pg / mL in 0,02 N Essigsäure). Pipette 1,0 ml Kollagen-Lösung in jede Vertiefung einer 12-Well Transwell-Platte (Corning). Wrap in Parafilm und lassen Sie über Nacht stehen auf einer flachen Oberfläche bei Raumtemperatur. </li></ul><ol><li> Mit Hilfe eines im Handel erhältlichen Mausstamm (dh C57Bl / 6, männlich 6-8 Wochen alt), euthanize Mäusen mit einem anerkannten Methode der Sterbehilfe, wie CO 2-induzierte Narkose. In der Regel 6 Mäusen erbringt genügend Zellen (1.5-2.0 x 10 5 Zellen / Maus) das Seeding einer 12-well Transwell Platte. </li><li> Sprühen Sie die Tierkadaver mit 70% EtOH-Lösung, um das Feld zu sterilisieren. </li><li> Mit sauberen chirurgischen Schere und Skalpell, entfernen Sie die Haut um die trachealen Bereich, und setzen die Luftröhre. Öffnen Sie den Bauch, entlang des Brustbeins geschnitten, und entfernen Sie den Brustkorb. Entfernen Gewebe bis zum Ende der Luftröhre ausgesetzt ist. </li><li> Legen Sie Luftröhre in einen 50 mL konische Röhrchen mit 30 ml Hams F12 Medium mit Antibiotika, auf Eis. </li><li> In einem sterilen lamellar-Haube, Transfer Luftröhrengewebe eine sterile 100 mm Petrischale mit 10 ml Hams F12 Medium mit Antibiotika. </li><li> Sanft sezieren Bindegewebe mit einer sterilen Pinzette und chirurgische Schere. </li><li> Transfer Luftröhrengewebe, um eine neue 100 mm Petrischale mit 10 ml Hams F12 Medium mit Antibiotika zu spülen. Cut Luftröhre entlang der vertikalen Achse zu Lumen aussetzen. </li><li> Transfer Luftröhre zu einem 50-ml-Tube mit 10 ml 0,15% Pronase-Lösung und Inkubation über Nacht bei 4 ° C. </li><li> Am zweiten Tag haben bereit: <ul><li> Bereiten Sie eine DNAse I-Lösung. Um 18 ml Hams F12 Medien mit Antibiotika 2 mL einer 10 mg / ml Rinderserumalbumin (BSA)-Stammlösung und 10 mg rohes Pankreas DNAse I. mach 1 mL aliquotiert und bei -20 ° C (aufgetaut auf Eis vor der Verwendung). </li><li> Bereiten Ham 's F12 Medium mit Antibiotika mit 20% fötalem Rinderserum (FBS). Zu 200 ml Hams F12 Basalmedien (Invitrogen) mit 50 mL hitzeinaktiviertem FBS, 2,5 ml einer 100 X Penicillin / Streptomycin (10 2 U/mL-10 2 mg / mL) Lösung und 250 mL einer 1000 X Fungizone Lösung . </li><li> Bereiten MTEC Basismedium mit Antibiotika. Um 475,5 mL DMEM/F12 basischen Medien (CellGro) add 7,5 ml 1 M HEPES-Lösung, 10 ml 200 mM Glutamin-Lösung, 2 ml einer 7,5% NaHCO 3-Lösung, 5 ml einer 100 X Penicillin / Streptomycin-Lösung, 500 mL einer 1000 X Fungizone Lösung </li><li> Bereiten MTEC medium/10% FBS. Um 45 ml MTEC grundlegende Medium mit Antibiotika, 5 ml hitzeinaktiviertem FBS. </li></ul></li><li> Schütteln Sie das Rohr (aus Schritt 1.8) 10-12 mal, und dann lassen Sie es für 30-60 Minuten stehen bei 4 ° C. </li><li> Fügen Sie 10 ml Hams F12 Medium mit 20% FBS und Antibiotika, um die Röhre und rock 12 mal. </li><li> Bereiten Sie 3 15 ml konische Röhrchen mit 10 ml Hams F12 Medium mit 20% FBS und Antibiotika. </li><li> Entfernen Luftröhren von Pronase-Lösung, abgesehen von dieser Lösung auf Eis. Transfer Luftröhre zum ersten konischen Rohr mit Hams F12 und das Röhrchen 12 mal. Wiederholen Sie diesen Vorgang zwei weitere Male. </li><li> Kombinieren Sie Pronase-Lösung mit den drei Überstände aus Schritt 1,13 in eine 50 ml Tube. Verbleibende Gewebe. </li><li> Zentrifugation bei 1400rpm (390 xg; Eppendorf 5810R-Zentrifuge mit einer A-4 bis 62 Rotor ausgestattet) für 10 min bei 4 ° C und Überstand verwerfen. </li><li> Vorsichtig das Pellet in 1 ml DNAse-Lösung (100-200 ul / Trachea)und inkubieren 5 min auf Eis. </li><li> Zentrifugation bei 1400rpm (390 xg) für 5 min bei 4 ° C und Überstand verwerfen. </li><li> Zellpellet in 8 ml MTEC-Medium mit 10% FBS </li><li> Platte Zellsuspension auf Primaria Platten (Falcon). Bei 37 ° C in einer Atmosphäre von 95% Luft, 5% CO 2 für 5 Stunden (Anmerkung: Dies ist eine negative Selektion Schritt für Fibroblasten). </li><li> Sammeln Zellsuspension aus Platten und Spülen Platten zweimal mit 4 ml MTEC mit 10% FBS. Pool Zellsuspension und wäscht in einem 50 mL konischen Rohr. </li><li> Conserve 1 mL für Zytospin und Zellzählung. Spin in einer Tischzentrifuge für 5 min bei 5.000 rpm (Eppendorf 5415D). Nehmen Sie 500 mL und Pellet erneut in verbleibende Überstand. Verwenden Sie 100 ul zur Zellzählung mit dem Trypanblau Vitalfärbung Methode. Conserve 4 Aliquots von 100 ul für Zytospin Analyse </li><li> Spin restlichen 15 mL Zellsuspension bei 1400rpm (390 xg) bei 4 ° C für 10 min. </li></ol> 2. Vermehrung und Differenzierung von MTEC Bei Air-Liquid-Interface Bereiten Retinsäure Stammlösungen. Stammlösung A: Wiegen Retinsäure in der Dunkelheit (Herr 300,44 g / mol) zu einer 5 mM Stammlösung in 95% EtOH zu machen. Shop in eine Folie eingewickelt Rohr bei -80 ° C. Bei Bedarf bereiten Stammlösung B (5 pM) durch Zugabe von 50 ul Stock A, 500 mL BSA-Lösung (100 mg / mL) und 49,5 ml Hanks balanced salt solution (HBSS). Shop in eine Folie eingewickelt Rohr bei -80 ° C für bis zu 4 Wochen. Bereiten MTEC Verbreitung Medium mit Retinsäure. Auf 45,7 mL MTEC Basalmedien Antibiotika enthalten, fügen Sie 2,5 ml hitzeinaktiviertem FBS, 1 ml Retinsäure Lager B, 250 ul Insulin-Lösung (2 mg / ml Insulin in 4 mM HCl), 250 ul Epidermal Growth Factor-Lösung (5 g / mL EGF in HBS mit 1 mg / mL BSA), 200 ul Rinder Hypophysenextrakt (15 mg / mL in HBS mit 1 mg / mL BSA), 50 ul Transferrin-Lösung (5 mg / ml Transferrin in HBS mit 1 mg / mL BSA ), 50 ul Cholera-Toxin-Lösung (100 mg / mL in HBS mit 1 mg / mL BSA). Filter sterilisieren endgültigen Medien Herstellung und Verwendung innerhalb von 2 Tagen der Vorbereitung. <ol><li> Entfernen Kollagenlösung von Transwell Platten stehen lassen unter der Motorhaube für 5 min, und waschen mit PBS 2 mal. </li><li> Nach der Zentrifugation Zellpellet in einem geeigneten Volumen der Proliferation Medien (500 mL), um plating von 7,5 x 10 4 -1,0 x10 5 Zellen pro Vertiefung zu erleichtern. Pipette 500 ul Zellsuspension auf der apikalen Oberfläche der Transwell Polycarbonatmembran einzufügen. Fügen Sie 1,5 ml der Proliferation Medien, um die basale Kompartiment des Transwell. </li><li> Inkubieren Sie die versunkenen MTEC Kulturen bei 37 ° C in einem befeuchteten Inkubator mit 95% Luft, 5% CO 2 für 7-10 Tage. </li><li> Warten Sie drei Tage vor wechselnden Medien die erste Zeit. Ändern Medien jeden zweiten Tag. Monitor-Kulturen durch visuelle Inspektion und Messung der transepithelialen Zellwiderstand mit einer Elektrode (EVOM Ohmvoltometer, World Precision Instruments, Sarasota, FL). </li><li> Wenn die Zellen konfluent erscheinen und epithelialen Widerstandes erreichte heute 1000 Ω / cm 2, sind die Zellen bereit, bei ALI unterscheiden. </li><li> Bereiten MTEC Basalmedien mit 2% NuSerum. Add NuSerum zu MTEC Basismedium zu einer Endkonzentration von 2% V / V. Add Retinsäure Lager B bis zu einer Endkonzentration von 1 x 10 -7 M vor der Verwendung. Bereiten Sie frische und innerhalb von 2 Tagen. </li><li> Lassen Sie Zelle für 10-14 Tage zu differenzieren, indem apikalen Medien und Austausch der Basalmedien mit 750 ul MTEC Basalmedien mit 2% Nuserum und Retinsäure. Ändern Sie den Basalmedien und waschen der apikalen Seite mit MTEC mit 2% NuSerum jeden zweiten Tag. </li></ol> 3. Anwendung von Zigarettenrauch zu Cultured Epithelzellen <ol><li> Expose der apikalen Seite der Transwell Kulturen Mainstream Zigarettenrauch mit einem CS Zellexposition System (EMI Instruments, Pittsburgh, PA). Siehe Abbildung 1 für Photographie des Apparates. Siehe Tabelle der spezifischen Reagenzien und Geräte für technische Spezifikationen. Kurz gesagt, besteht die Vorrichtung aus einer Schlauchpumpe, die jede Zigarette raucht in ~ 7-8 Züge, Zeichnung in den Mainstream Rauch in einem Polypropylen-Linie, die einen belüfteten Exposition Kammer verbunden ist. Die Exposition Kammer bei 37 ° C durch zirkulierendes Wasser, und bei einer Atmosphäre von 5% CO 2 auf eine Gasleitung. Die Zellen können, um den Rauch mit Kentucky 3R4F Forschung Verweis Filterzigaretten (The Tobacco Research Institute, University of Kentucky, Lexington, KY) ausgesetzt werden. Typischerweise Zellen sind, um den Rauch von 1 bis 2 Zigaretten ausgesetzt, wodurch 100-200 mg / m 3 von insgesamt Feinstaub (TPM). Control-Kulturen werden Raumluft und für ein gleichwertiges Expositionszeit ausgesetzt. </li><li> Das TPM ist nach dem Protokoll des Herstellers mit dem TE geliefert gemessen-10c Rauchmaschine (Teague Enterprises). Kurz gesagt, ist ein Filter (Pallflex) in ein Inline-Edelstahl-Halter auf einem Entnahmerohr, der von der Probenahme-Anschluss auf der Räucherkammer, um eine konstante Strömungspumpe (Abtasteinheit) platziert. Ein Abfluss Schlauch verbindet die Abtasteinheit eine Gasuhr (Dry Gas Meter, ONM61, 67, AEM). Der Filter wird vor und nach der Gasentnahme gewogen. Das gesamte Material abgelagert auf dem Filter in mg ist für das Gesamtvolumen der Luftproben normalisiert. </li><li> Die Zellen können dann zu jedem Zeitpunkt (dh, 0-24 Uhr) nach der Exposition für Standard-Zell-analytische Verfahren (dh, Western Immunoblot-Analyse, mRNA-Analyse, etc.) oder Mikroskopie (dh, konfokale oder Elektronenmikroskopie) geerntet werden. Die Kulturmedien kann auch für Cytokine oder LDH-Freisetzung für Zytotoxizitätsassays analysiert werden. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse Erfolgreiche epithelialen Isolation, Proliferation und Differenzierung bei ALI sollte eine intakte Monolayer mit einem Pflasterstein-Morphologie zu erhalten. Transepithelilal Zellwiderstand von gesunden Kulturen sollten ca. 1000-2000 Ω / cm 2 sein. Abbildung 2 zeigt eine Monoschicht von Maus respiratorischen Epithelzellen für Epithelzellen und Cilien Marker unter Kontrollbedingungen und nach Zigarettenrauch Exposition gefärbt. Abbildung 3 zeigt repräsentative elektronenmikroskopische Aufnahmen von gesunden MTEC Kulturen darstellt Ultrastruktur und Zilien Morphologie. <img src="/files/ftp_upload/2513/2513fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Vorbereitung von Epithelzellen durchläuft drei Phasen, eine Isolierung Schritt, eine Ausbreitung der Bühne, und eine Differenzierung der Bühne an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche (Schema). Epithelzellen sind von der Maus Luftröhre, auf Transwells, wo sie sich vermehren in Submerskultur ausgesät isoliert und dann in die Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche, wo sie in vollem Umfang zu differenzieren umgewandelt. Experimente sind in der Regel am 24. Tag der kontinuierlichen Kultur durchgeführt. Das Bild zeigt ein Modell-System für die Belichtung von kultivierten Zellen zu Mainstream-Zigarette zu rauchen. Ein Transwell ALI Kultur ist innerhalb einer benutzerdefinierten modular Zigarettenrauch Lieferung System, das für Temperatur, Luftfeuchtigkeit und CO 2 gesteuert wird gestellt. <img src="/files/ftp_upload/2513/2513fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2 Epitheliale Zellkulturen wurden fixiert und Zellkerne (Hoechst 33258), F-Aktin (grün; Alexa-Fluor-488-konjugierten Phalloidin). Und die Zilien Marker acetyliertes α-Tubulin (rot, Cy3-konjugierten sekundären Antikörper). Die unteren Bilder zeigen gleichwertige Bilder von Epithelzellen 4 Stunden nach der Exposition gegenüber Tabakrauch (2 Zigaretten, 150 mg / m 3). (B) Lactatdehydrogenase (LDH)-Freisetzung wurde im Basalmedium 24 Stunden nach der Exposition gegenüber unterschiedlichen Dosen von Zigarettenrauch wie angegeben gemessen. <img src="/files/ftp_upload/2513/2513fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Air-Liquid-Interface Kulturen von Epithelzellen aus der Maus trachealen Epithel isoliert in mehrere Subtypen unterschieden, die durch Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) haben die Eigenschaften von Flimmerepithel, basal, und nicht Flimmerzellen 1. Diese Zellen sind typisch pseudostratified respiratorischen Epithels. Abbildung Etiketten entsprechen: bb: Basaltemperatur, a: Axonem, m: Mitochondrien, n: Kern, s: Substrat (Polycarbonat-Membran), mv: microvili

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</ol>

Das Protokoll beschreibt Isolierung von Maus tracheale Epithelzellen aus den Protokollen der Sie et al angepasst., 1, und andere 2-3 mit Modifikationen. Wie bei jedem Protokoll beschreibt Zelle Isolationen, ist der wichtigste Aspekt, um eine Verunreinigung durch bakterielle oder pilzliche Erreger durch strikte aseptische Techniken zu vermeiden. Ein zweiter wichtiger Schritt ist, Fibroblasten-Kontamination der Kulturen, die durch sorgfältige Präparation der Luftröhre vermieden werden können...

* Die Zigarettenrauchen Maschine ist eine speziell entwickelt und gefertigt 14 &quot;x14&quot; x20 &quot;Dual gekammert und mit Wassermantel hellen Farbton klarer Beweis dafür, 1 / 2&quot; dicken Polycarbonat Lexan Kammer für Zigarettenrauch Exposition mit der Temperatur gesteuert, Wasserstand Sensor gesteuert off-System abgeschaltet. Eine Zigarette rauchen / schnaufend ist für eine variable Zigarette paffte Tarife installiert. Wenn das Gerät in Betrieb ist, imitiert sie einen Inkubator in dem Sinne, dass die Temperatur, Luftfeuchtigkeit und Kohlendioxid in das System gesteuert werden. Das System umfasst: (I) eine maßgeschneiderte Zweikammer-/ Wasser-ummantelten Einheit, die eine kontrollierte Umgebung für Gewebekultur Experimente unterhält. (II) Eine digitale Hochleistungs-, hohe Präzision Doppelpumpe Wassertemperatur Thermostat mit Wasserstandssensor und Temperaturregelung (III) Eine Zigarette rauchen Einheit mit schnaufend Pumpe. (IV) A Pumpzyklus Sensorsteuerung Rate Cycler (IV) A Edelstahl hohe Präzision in-Line Filterhalter. (V) Ein abnehmbarer Deckel montiert 11 / 2 &quot;Größe axiale Gleichmäßigkeit Zigarettenrauch Umluftgebläse. (VI) Ein mittlerer Größe Wasserbad mit Halterung für die Wasser-Pumpe. (VII) A 1 / 2&quot; dicken Plexiglas Tablett mit Halterungen für die puff Pumpe und Halter für Zigarettenasche Sammler. Diese Maschine, wie beschrieben, kann mit ähnlichen im Handel erhältlichen Rauchen Maschinen wie der Art zur Verfügung, die von TSE-Systeme (ersetzt <a href="http://www.tse-systems.com">www.tse-systems.com</a> ).

isolierung von maus respiratorischen epithelzellen und der exposition gegenüber experimental zigarettenrauch bei air liquid-interface

Isolation of Mouse Respiratory Epithelial Cells and Exposure to Experimental Cigarette Smoke at Air Liquid Interface  

Pulmonale Epithelzellen aus den Atemwegen von Mäusen und kultiviert bei Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche (ALI) als ein Modell der differenzierten respiratorischen Epithels isoliert werden. Ein Protokoll ist für die Isolierung und die Preisgabe dieser Zellen Mainstream Zigarettenrauch (CS) beschrieben, um epithelialen Zell-Antworten auf CS Exposition zu studieren. Das Protokoll besteht aus drei Teilen: der Isolierung von Epithelzellen der Atemwege von der Maus Luftröhre, die Kultivierung dieser Zellen an der Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche (ALI) als ausdifferenzierten Epithelzellen und die Lieferung von kalibrierten Mainstream CS, diese Zellen in Kultur. Die ALI Kultur-System ermöglicht die Kultur des respiratorischen Epithelien unter Bedingungen, die mehr ähneln ihren physiologischen Einstellung als gewöhnliche flüssige Kultur-Systemen. Die Untersuchung der molekularen und zellulären Reaktionen auf Lunge CS Exposition ist ein kritischer Faktor für das Verständnis der Auswirkungen von Umweltfaktoren Luftverschmutzung auf die menschliche Gesundheit. Forschungsergebnisse in diesem Bereich kann letztlich zum Verständnis der Ätiologie der chronisch-obstruktiven Lungenerkrankung (COPD) und andere Tabak-bedingten Krankheiten, die wichtigsten globalen Gesundheitsprobleme darstellen beitragen.

Pulmonale Epithelzellen aus den Atemwegen von Mäusen isoliert und kultiviert bei Luft-Flüssigkeit-Grenzfläche als ein Modell der differenzierten respiratorischen Epithels. Ein Protokoll ist für die Isolierung, Kultivierung und Freilegen dieser Zellen zu Mainstream Zigarettenrauch beschrieben, um molekulare Antworten zu diesem Umweltgift zu studieren.

Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface

Pulmonale Epithelzellen können aus den Atemwegen von Mäusen isoliert und an einer Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche (Air-Liquid Interface, ALI) kultiviert werden, um als Modell für differenzierte ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Atemwegs-Epithelzellen zu isolieren, um die toxischen Wirkungen einer Exposition gegenüber Zigarettenrauch zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst die Tracheen von Mäusen präpariert und anschließend in einer Pronase-Lösung verdaut werden. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, Epithelzellen zu gewinnen und die Flüssigkultur zu vermehren.Der dritte Schritt besteht darin, die Kulturen an einer Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche zu differenzieren. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Exposition der epithelialen Zellen gegenüber apikalem Zigarettenrauch an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die mittels Immunfluoreszenzmikroskopie eine vollständig differenzierte monolayerartige Anordnung epithelialer Zellen zeigen.Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der chronisch obstruktiven Lungenerkrankung zu beantworten, beispielsweise die Auswirkungen einer Exposition gegenüber Zigarettenrauch auf die Morphologie der CLIA sowie auf zelluläre Verletzungsmarker, die durch Zigarettenrauch induziert werden. Beginnen Sie einen Tag vor der Sektur mit den Vorbereitu

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Medizin

Ein hoch gereinigte Präparation von Mauslunge dendritischen Zellen beschrieben wird. Besonderer Nachdruck wird auf die Isolierung von konventionellen dendritischen Zellen Teilmenge gegeben.

Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen

Das Ziel dieses Protokolls ist es, automatisierte Methoden zur Quantifizierung chronischer Lungenpathologien in einem Mausmodell der COPD bereitzustellen. Das Protokoll umfasst die Exposition von Mäusen gegenüber Zigarettenrauch (CS), die Messung der Lungenfunktion, das Aufblasen der Lunge und die Verwendung morphometrischer Methoden zur Messung von Emphysem und Umbau kleiner Atemwege bei Mäusen.

Automatisierte Messung von Lungenemphysem und Klein Airway Remodeling im Zigarettenrauch ausgesetzten Mäuse

Das Ziel dieses Protokolls ist es, menschliche organotypische 3D-Bronchial- und Nasengewebemodelle dem Mainstream-Zigarettenrauch (CS) an der Luft-Flüssig-Grenzfläche auszusetzen. Der Einfluss von CS auf das Gewebe wird dann mit Hilfe eines Cytochrom-P450-Aktivitätsassays, einer Zilienschlagmessung und eines systembiologischen Ansatzes untersucht.

Folgenabschätzung Wiederholte Exposition von organotypischen 3D bronchiale und nasale Zellkulturmodelle zu Whole Zigarettenrauch

Beschrieben hier ist ein Protokoll zu untersuchen, wie Zigarettenrauch-Extrakt bakterielle Besiedlung in Lungenepithelzellen beeinflusst.

Studium der Auswirkungen von Zigarettenrauch auf Pseudomonas-Infektion in Lungenepithelzellen

Dieses Protokoll zeigt die Untersuchung der pathophysiologischen Wirkungen von Zigarettenrauch (CS) mit einem ganzheitigen Inhalationssystem (WBI) im eigenen Haus gebaut. Dieses System kann Tiere UNTER kontrollierten wiederholbaren Bedingungen CS aussetzen, um CS-vermittelte Wirkungen auf Lungenemphysem und Hämatopoese zu erforschen.

Zigarettenrauchexposition bei Mäusen mit einem Ganzkörper-Inhalationssystem

In diesem Artikel wurden primäre Lungenendothelzellen aus neonatalen Mäusen isoliert und kultiviert.

Isolierung von primären Lungenendothelzellen der Maus

In dieser Arbeit wird eine reproduzierbare, kostengünstige und robuste Methode zur Isolierung und Expansion von primären Bronchialepithelzellen für das langfristige Biobanking und die Erzeugung differenzierter Epithelzellen durch Kultur an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche vorgestellt.

Isolierung von Bronchialepithelzellen aus reseziertem Lungengewebe für Biobanken und Etablierung gut differenzierter Luft-Flüssigkeits-Grenzflächenkulturen

In dieser Arbeit beschreiben wir ein in vitro Modell zur Isolierung und Differenzierung von murinen Atemwegsepithelzellen, wobei der Schwerpunkt auf ihrer Akklimatisierung an chronischen Zigarettenrauchextrakt (CSE) liegt. Das Modell könnte verwendet werden, um die Multi-Omics-Auswirkungen von CSE umfassend zu charakterisieren, was möglicherweise Einblicke in die zellulären Reaktionen unter chronischer Rauchbelastung liefert.

In vitro Modell zur Untersuchung der Differenzierung und Veränderung von Multi-Omics an murinen Atemwegsepithelzellen, die mit Zigarettenrauchextrakt stimuliert wurden

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung lebender immuner und nicht-immuner Populationen aus der Lunge von Mäusen in einem stabilen Zustand und nach einer Influenzainfektion. Es bietet auch Gating-Strategien zur Identifizierung von epithelialen und myeloischen Zelluntergruppen.

Isolierung von lebenden myeloischen und epithelialen Zellpopulationen aus der Lunge der Maus

Dieses Protokoll stellt eine auf Flusszytometrie basierende Methode vor, um lebensfähige alveoläre Typ-II-Epithelzellen (AECII) aus neonatalen, juvenilen oder adulten Mauslungen (infiziert oder nicht infiziert) zu isolieren. Dieser Ansatz ermöglicht nachgelagerte molekulare und/oder funktionelle Studien von AECII, um deren Rolle während der Lungenentzündung und -infektion zu identifizieren.

Isolierung von alveolären Typ-II-Epithelzellen aus neonatalen, juvenilen und adulten Mauslungen, anpassungsfähig für infektiöse experimentelle Umgebungen

Erfahren Sie die Isolierung von Maus-Trachealepithelzellen und deren Kultivierung an der Luft-Flüssig-Grenzfläche zur Untersuchung von Zigarettenrauchtoxizität. Dieses Protokoll ermöglicht die Analyse zellulärer Schädigungsmechanismen.

Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface (Video) | JoVE Journal

Isolierung von Maus respiratorischen Epithelzellen und der Exposition gegenüber Experimental Zigarettenrauch bei Air Liquid-Interface

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