Name: Generierung von Composite-Anlagen in Medicago truncatula Für Nodulation Assays verwendet (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: Lernen Sie die Generierung von Composite-Pflanzen mit transgenen Wurzeln in Medicago truncatula für Nodulationsstudien. Diese Agrobacterium-basierte Methode ermöglicht schnelle Analysen von Genfunktionen.

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Die Autoren bedanken sich bei Dr. Chris Taylor (Ohio State University) für die Einführung von hairy root-Technologie in unser Labor und Drs danken. Senthil Subramanian (South Dakota State University), Juan Zhang (Ludong Universität Shandong China) zur Verbesserung des Protokolls. Wir danken auch Dr. Hao Cheng (Nanjing Agriculture University) für hilft bei der Herstellung dieses Video. Diese Arbeit wird teilweise durch Zuschüsse aus DOE (DE-SC0001295), NSF (MCB-0923779) und USDA (2010-65116-20514) zu OY unterstützt

Das folgende Protokoll wurde verwendet, um hairy root Composite-Anlagen erzeugen in einem Modell Leguminosenarten M. truncatula. Ähnliche Protokolle für mindestens acht Pflanzenarten 1-4 angepasst. Wir benutzten M. truncatula hairy root Composite Pflanzen zu studieren Genfunktionen in Wurzel und Knötchen Entwicklung. Das Protokoll wurde in vier Abschnitte unterteilt: 1) Vorbereitung pflanzlichen Materialien, 2) erzeugt hairy root Korbblütler, 3) symbiontischen Rhizobien Infektion und 4) transgenen Wurzel Identifikation. Wir verwendeten den binären Vektor mit dem grün fluoreszierenden Protein (GFP)-Gen als Reporter für das Screening von transgenen Wurzel in Composite-Pflanzen 3. Im Vergleich zu Antibiotika-Selektion ist GFP-basierte Screening schnell, einfach und kostengünstig. In unserem konstruieren, ist die ER-Ausdruck-optimierte GFP-Gen durch die Super-Ubiquitin-Promotor, die starken konstitutiven GFP-Signale in transgenen Wurzeln getrieben hat, was eine einfache Unterscheidung zwischen transgenen und nicht transgenen Wurzeln. 1. Vorbereitung Werk Materials <ol><li> M. truncautla Samen von Pflanzen in einem Gewächshaus (50% relative Luftfeuchtigkeit, 16 / 8 h hell / dunkel, 22/18 ° C Tag / Nacht-Temperatur) geerntet. Reife Samen können bei 4 ° C gelagert werden </li><li> Etwa 100 Samen werden in 10 ml konzentrierter Schwefelsäure (95-98%, Sigma-Aldrich, MO) für 10 min mit periodischen Schütteln scarified. </li><li> Die Samen sind 5-7 mal mit sterilem Wasser unter leichtem Rühren gespült. </li><li> Die Samen werden dann in Wasser bei Raumtemperatur getränkt für 6 Stunden und bei 4 ° C für 36-48 Stunden, um die Keimung zu synchronisieren. </li><li> Ca. 20-30 Samen werden auf feuchtem Filterpapier Papiere in einer Petrischale ausgebreitet. Sie sind bei 22 ° C gehalten, mit 16 / 8 h Licht / Dunkel-Zyklus und 40 μmol.m -2. S -1 Lichtintensität, für 5-6 Tage. </li><li> Gekeimten Sämlinge werden in den Boden überführt und im Gewächshaus für einen Monat. </li></ol> 2. Generieren von Hairy Root-Composite-Pflanzen <ol><li> Binary Konstrukte tragen Gene von Interesse wurden in A. verwandelt rhizogenes über Standardprotokolle. Wir haben eine Reihe von binären Vektoren, die das GFP-Gen als Marker, dass das Screening der transgenen Gewebe erleichtern entwickelt. Diese Vektoren enthalten verschiedene Promotoren und haben alle Gateways Klonierungsstellen (Invitrogen, Carlsbad, CA) für die Überexpression oder Inaktivierung von Genen gezielt 3,5. </li><li> A. rhizogenes ist in 50ml LB-Medium mit entsprechenden Antibiotika-Selektion bei 28 ° C für 16-24 Stunden kultiviert. </li><li> Die Bakterien werden gesammelt und zu einer endgültigen Konzentration von OD 600 resuspendiert = 0,3 in einer Stickstoff-freie Pflanze Nährlösung (Tabelle 1 und 6). </li><li> Zur Unterstützung hairy root Regeneration, eine sterilisierte Trägermatrix ("Rock Wolle", Hummert International, Earth City, MO) in Stecker von ca. 3 cm 3 geschnitten. Wir legen 4 Stecker in eine Petrischale. </li><li> Ein Loch wird oben auf jeder Stecker mit einer Pipettenspitze stieß auf das Einfügen von Explantaten zu erleichtern. A. rhizogenes (5 ml) wird zu jedem Plug aufgenommen. </li><li> A schießen Abschnitt mit 2-3 Achselknospen wird durch einen schrägen Schnitt herausgeschnitten. Das Explantat wird dann in den Stecker eingeführt und angebaut bei 22 ° C für etwa drei Wochen. Wir halten die Medicago Explantate ohne Bewässerung für die ersten 10 Tage, dann, Wasser sie mit 5 ml Stickstoff-freie Lösung, wenn nötig. Wir fanden, dass das Entfernen der Sprossmeristem könnte die Bildung von Adventivwurzeln zu verringern. </li></ol> 3. Symbiontischen Rhizobien (Sinorhizobium meliloti) Infektion <ol><li> Nach drei Wochen werden einige Adventivwurzeln aus der Steinwolle entstehen. Die hairy root Composite Pflanzen sind Sand oder Vermiculit (sterilisiert) übertragen, mit oder ohne die Steinwolle. Sie sind im Gewächshaus bei 22 ° C, 16 / 8 h Licht / Dunkel-Zyklus, und 300 μmol.m -2. S -1 Lichtintensität für eine weitere Woche. </li><li> Vor Rhizobien-Infektion, S. meliloti 1201 ist in 50 ml Hefeextrakt-Mannitol-Medium für 7 Tage bei 30 ° C (Tabelle 2, und 6,7) kultiviert. </li><li> Re suspendiert Rhizobien Zellen sind, um eine endgültige Konzentration von OD 600 = 0,08 unter Verwendung von Stickstoff frei Ernährung Lösung verdünnt. Ein 10-ml frischen Suspension von S. meliloti wurde jedem Verbund-Anlage angewendet, um Knoten zu induzieren. </li></ol> 4. Transgene Root-Identification <ol><li> Zwei Wochen nach Rhizobien Inokulation werden die Composite-Pflanzen durch Waschen mit Wasser bis verwurzelt. Die Wurzeln können leicht von Sand oder Perlite werden in Wasser getrennt. </li><li> Wir legen den haarigen Wurzeln unter einem UV-Mikroskop (Nikon SMZ1500, Excitation 460-500nm, 505nm Dichroic, Barrier mehr als 510nm). Die transgenen Wurzeln sind GFP positiv und die Adventivwurzeln sind GFP negativ. Wir sammeln dann die Wurzeln according der GFP-Signal, und zählen Sie die Knoten-Nummern, messen Sie die Wurzellänge und berechnen lateralen Wurzel Dichte. Die GFP negativen Wurzeln als Kontrolle verwendet. </li></ol> 5. Repräsentatives Ergebnis In unserem Experiment, das neue Haarwurzeln aus den Explantaten in 2-3 Wochen regeneriert nach A. rhizogenes Inokulation. Unter dem UV-Mikroskop zeigen transgene Wurzeln Durchführung der GFP-Gen starke grüne Fluoreszenz (Abb. 1). Die Höhe der regeneriert Wurzeln und der Anteil der GFP positiven Wurzeln hängen von den Bedingungen der Explantate und das Wachstum Umgebung von Composite plants.On Durchschnitt waren 25% der Wurzeln produziert transgenen haarigen Roots 3. Um die Transformationseffizienz, 1) zu erhöhen die Kunststoffabdeckung doom, wie auf dem Video zu sehen, genügt, um die Feuchtigkeit in das Wachstum Fach für die ersten paar Tage zu halten und Pflanzen benötigen nur wenig Wasser in den ersten Tagen. Übermäßige Bewässerung ist schädlich für hairy root Bildung, 2) die Konzentration von Agrobacterium innoculant ist für die Transformation von Bedeutung. Übermäßige Menge an Zellen sind nicht hilfreich, hairy root Bildung oder Knotenbildung. Für Knotenbildung, die Bewässerung Lösung zu Stickstoff-free Pakete braucht, sonst werden nur wenige Knötchen bilden. Die hairy root Composite Pflanzen lassen sich mit den Keimblättern bzw. entact Sämlinge als Ausgangsmaterial werden. Nur geringfügige Änderungen der oben genannten Protokoll sind ncessary zu haarigen Wurzeln aus anderen Geweben 8 zu erzeugen. Wichtig ist, dass jeder hairy root ein unabhängiges Transformationsereignis. Daher sind die Phänotypen in einem Composite-Anlage beobachtet die Summe von mehreren transforamtion Ereignisse, die durch Wiederholungen in mehreren zusammengesetzten Pflanzen bestätigt werden benötigt <img src="/files/ftp_upload/2633/2633fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. A. Transgene Wurzeln aus haarigen Wurzeln sortiert werden. B. Knöllchen wurden in der behaarten Wurzel Composite Pflanzen gebildet. Wir setzten 4-Wochen alten M. truncatula hairy root Pflanzen unter dem UV-Mikroskop und dem GFP positive Wurzeln können leicht identifiziert werden. (Roter Pfeil: GFP Wurzel; Gelber Pfeil: non-GFP root) <table border="1"><tbody><tr><td> Lager </td><td> g/200ml </td><td> ml Brühe / Liter </td></tr><tr><td> MgSO 4 .7 H 2 O </td><td> 12,3 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> CaCl 2 .2 H 2 O </td><td> 14,7 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> K 2 HPO 4 .3 H 2 O </td><td> 6,8 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> K 2 SO 4 </td><td> 11 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> Fe Cl 3 .6 H 2 O </td><td> 0,49 </td><td> 2,5 </td></tr><tr><td> Mikronährstoffe </td><td> Siehe unten </td><td> 1 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Mikronährstoffe </td><td> g pro Liter </td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> 0,142 </td></tr><tr><td> MnSO 4. H 2 O </td><td> 0,077 </td></tr><tr><td> ZnSO 4 .7 H 2 O </td><td> 0,1725 </td></tr><tr><td> CuSO 4 .5 H 2 O </td><td> 0,037 </td></tr><tr><td> NaMoO 4. H 2 O </td><td> 0,024 </td></tr><tr><td> CoCl 2. H 2 O </td><td> 0,0025 </td></tr><tr><td> NiSO 4 </td><td> 0,001 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Nitogen-freie Ernährung Lösung <table border="1"><tbody><tr><td> K 2 HPO4 </td><td> 0.5g </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 0.1g </td></tr><tr><td> MgSO 4 · 7H 2 O </td><td> 0.2g </td></tr><tr><td> Hefeextrakt </td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> Mannitol </td><td> 10g </td></tr><tr><td> pH = 6,8 </td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Hefeextrakt Mannitol-Medium (pro Liter)

<ol><li>Limpens, E., Ramos, J., Franken, C., Raz, V., Compaan, B., Franssen, H., Bisseling, T., Geurts, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+in+Agrobacterium+rhizogenes-transformed+roots+of+Arabidopsis+and+Medicago+truncatula%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Bot%22%5BJournal%5D)">RNA interference in Agrobacterium rhizogenes-transformed roots of Arabidopsis and Medicago truncatula.</a> J. Exp. Bot. 55, 983-992 (2004).</li>
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<li>Zhang, J., Subramanian, S., Stacey, G., Yu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavones+and+flavonols+play+distinct+critical+roles+during+nodulation+of+Medicago+truncatula+by+Sinorhizobium+meliloti%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Flavones and flavonols play distinct critical roles during nodulation of Medicago truncatula by Sinorhizobium meliloti.</a> Plant J. 57, 171-183 (2009).</li>
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</ol>

Generieren hairy root Composite-Anlage ist eine schnelle und einfache Methode, um große Mengen von transgenen Material für viele dikotyle Arten zu erhalten. Obwohl diese Methode nicht selbst herstellen kann transgenen Samen, kann es transgenen Materialien in ein paar Wochen zu produzieren. Die Methode eignet sich besonders für Anlagen, die Schwierigkeit, über Gewebekulturen oder die Erzeugung von stabilen Transformanten haben. Im Laufe der Jahre haben wir diese Technologie verwendet, um Genfunktionen, Promoter Funktionen, microRNAs, Wurzel-und seitliche Wurzel Entwicklung, Verteidigung und abiotischen Stress-Reaktionen, Knotenbildung und andere symbiotische Prozesse, Hormon-Reaktionen, Metabolic Profiling, Gen-Profiling-, Proteom-Analyse und Studie andere biologische Prozesse. Das Protokoll ist robust und reproduzierbar.

generierung von composite-anlagen in medicago truncatula für nodulation assays verwendet

Generation of Composite Plants in Medicago truncatula used for Nodulation Assays

Ähnlich wie Agrobacterium tumerfaciens kann Agrobacterium rhizogenes ausländischen DNAs in Pflanzenzellen auf das autonome root-induzierenden (Ri)-Plasmid basierte Übertragung. A. rhizogenes kann hairy root Bildung auf dem Pflanzengewebe und bilden zusammengesetzte Pflanzen nach der Transformation. Auf diesen Korbblütler, sind einige der Wurzeln regeneriert transgenen, trägt das Wildtyp-T-DNA und der technisch binären Vektors, während die Triebe sind noch nicht transgenen, dazu dient, Energie und Wachstum zu unterstützen. Diese hairy root Composite Pflanzen produziert nicht transgenen Samen, aber es gibt eine Reihe von wichtigen Funktionen, die diese Korbblütler sehr nützlich machen in der Pflanzenforschung. Zuerst mit einem breiten Wirtsspektrum, A. rhizogenes lassen sich viele Pflanzenarten, insbesondere Dikotyledonen, so dass die Gentechnik in einer Vielzahl von Arten. Zweitens, A. rhizogenes infizieren Gewebe und Explantate direkt, keine Gewebekulturen vor der Transformation ist notwendig, um Composite-Pflanzen zu erhalten, wodurch sie ideal für die Transformation von widerspenstigen Pflanzenarten. Darüber hinaus können transgene Wurzelgewebe in einer Angelegenheit von Wochen generiert werden. Für Medicago truncatula, können wir transgenen Wurzeln in so kurz wie 3 Wochen erhalten, schneller als normal floral dip Arabidopsis-Transformation. Insgesamt ist die hairy root Composite Anlagentechnik ein vielseitiges und nützliches Werkzeug, um Genfunktionen zu studieren und root related-Phänotypen. Hier zeigen wir, wie hairy root Composite Pflanzen verwendet werden, um Pflanzen-Interaktionen und Rhizobium nodulation in der schwer zu verwandeln Arten M. Studie werden truncatula.

Wir zeigen, wie hairy root Composite Pflanzen können verwendet werden, um Pflanzen-Interaktionen und Rhizobium nodulation in der schwer zu verwandeln Arten zu studieren<em&gt; Medicago truncatula</em&gt;.

Generierung von Composite-Anlagen in Medicago truncatula Für Nodulation Assays verwendet

Ähnlich wie Agrobacterium tumefaciens kann Agrobacterium rhizogenes fremde DNAs in Pflanzenzellen übertragen, basierend auf dem autonomen wurzelinduzierenden (Ri)-...

Hallo, mein Name ist Oliver Yu vom Dan Plant Science Center. Heute zeigen wir Ihnen, wie man Ute-Compote-Pflanzen mittels Agrobacterium-Ogn erzeugt. Diese Technik wurde vom Dan Center von Dr. Chris Taylor, der derzeit an der Ohio State University tätig ist, eingeführt.Mehrere meiner ehemaligen Gruppenmitglieder haben diese Techniken im Laufe der Jahre verbessert, und heute haben meine derzeitigen Gruppenmitglieder, Dr. Stone und Mao, dieses Video zusammengestellt, um zu zeigen, wie Harry-Root-Composite-Pflanzen hergestellt werden. Agrobacterium-ZOS-Stämme ähneln Agrobacterium tumefaciens darin, dass sie fremde DNA in Pflanzen einführen, doch die ZOS-Stämme können eine stärkere Wurzelbildung in Wildtyp-Geweben hervorrufen, wodurch Composite-Pflanzen wie diese entstehen. Bei diesen Composite-Pflanzen sind einige der Wurzeln transgen, während die Sprosse weiterhin vom Wildtyp sind.Daher erzeugt diese Technologie keine transgenen Samen. Es gibt jedoch drei wesentliche Vorteile von Pflanzen mit hohem Campy-Wurzelgehalt, die diese Technologie äußerst nützlich machen. Erstens können viele Pflanzenarten, insbesondere dichoe Arten, durch agrobakterielle Infektion transformiert werden.Zweitens müssen wir vor der Transformation keine Gewebekultur etablieren. Wir können viele Pflanzenteile wie Keimlinge, Triebe und Co verwenden, um direkt campy-Pflanzen zu erzeugen. Und schließlich können wir innerhalb von Wochen transgene Wurzelgewebe erhalten.Für die Transformation von Sojabohnen- und Medicago-Wurzeln können wir transgene Wurzeln bereits innerhalb von drei Wochen erhalten, was schneller ist als eine OPIS-Transformation. Insgesamt ist die Hochwurzelzell-Pflanzentechnologie ein sehr nützliches Werkzeug, um Genfunktionen und wurzelbezogene Phänotypen zu untersuchen. Nr. Hallo, mein Name ist Ong.Hallo, mein Name ist, dort ist mein Kameramann Bill. Heute stellen wir den Harry-Wurzel-Kompositpflanzen-Protokoll vor. Ja, wir verwenden dieses Protokoll in mehreren unserer Projekte.Ich habe bereits, wir haben angefangen, ja. Ja. Für unsere Demonstration verwenden wir Meta Cargo Tula als Beispiel. Dies sind reife Meta Cargo-Schoten.Legen Sie die Schoten auf eine Mahlschale und mahlen Sie die Schoten mit einer langen, kräftigen Bewegung. Trennen Sie die Samen von den Samenkapseln, indem Sie vorsichtig schütteln, und geben Sie die Samen in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen. Geben Sie anschließend fünf Milliliter konzentrierte Schwefelsäure hinzu.Sehr sorgfältiges Narben. Dauert etwa 10 Minuten. Ein saures Vortex der Röhre zwei bis drei Mal.Während der Säurebehandlung verfärbt sich die Samenschale gelb. Entfernen Sie die Schwefelsäure aus dem Reagenzglas und spülen Sie die Samen mindestens fünfmal mit steriler Wasser nach. Schlämmen Sie die Samen sechs Stunden lang in entionisiertem Wasser bei Raumtemperatur ein und lagern Sie sie anschließend zwei Tage lang bei vier Grad Celsius.Um die Keimung zu synchronisieren, verteilen Sie 20 bis 30 Samen auf feuchtem Filterpapier in der Petrischale. Nach fünf bis sechs Tagen überführen Sie die Keimlinge in Erde und kultivieren sie anschließend vier Wochen lang im Gewächshaus.Für die Transformation von Kompositpflanzen verwenden wir normalerweise den Agrobacterium-Stamm Zony K 5 99. Der Shuttlevektor oder binäre Vektor kann mittels des standardmäßigen Agrobacterium tumefaciens-Transformationsprotokolls in den Stamm K 5 99 eingeführt werden. Inokulieren Sie das Agrobacterium und kultivieren Sie es bei 30 °C für 16 bis 24 Stunden. Sammeln Sie die Zellen, indem Sie die Kulturlösung in ein 50-mL-Zentrifugenröhrchen überführen.Zentrifugieren Sie es bei 5.000 ×g für 30 Minuten. Resuspendieren Sie das Pellet mit einer stickstofffreien Nährlösung. Stellen Sie sicher, dass die Agrobakterienzellen auf einen OD600 von 0,3 verdünnt werden.Diese Konzentration ist wichtig für eine maximale Transformation. Wir verwenden Gesteinswand als Trägermatrix. Die Verwendung dieses Materials ist wichtig für eine Transformation mit hoher Frequenz.Schneiden Sie die Felswand auf die richtige Größe zu. Stecker. Stellen Sie an der Oberseite ein Loch mit einem Durchmesser von etwa eineinhalb bis zwei Zentimetern her. Geben Sie mithilfe einer Pipettenspitze jeweils fünf Milliliter der resuspendierten Agrobacterium-Zony-Lösung in jeden Stecker.Wählen Sie einen Stängelabschnitt mit zwei bis drei Nebenknospen aus und führen Sie einen schrägen Schnitt durch. Stecken Sie die Pflanzenteile in die Öffnung in der Felswand. Stellen Sie die geschnittenen Pflanzen für drei Wochen in eine Wachstumskammer oder auf die Laborbank.Geben Sie alle 10 Tage fünf Milliliter Nährlösung in jeden Steckling. Nach drei Wochen regenerieren sich die Wurzeln von der Schnittseite. Tauchen Sie die Pflanze in Wasser ein.Entfernen Sie die aufgeweichte Felswand vorsichtig, ohne die Wurzeln zu beschädigen. Achten Sie darauf, die gesamte Felswand zu entfernen. Sie können die kompositen Pflanzen mit Haarwurzeln für Symbioseexperimente in Sand oder Perlit umsetzen. Kultivieren Sie das Rhizobium sieben Tage lang bei 30 Grad Celsius in einem Hefeextrakt-Mannit-Medium.Sammeln Sie die Zoosporozysten-Zellen erneut ein. Suspendieren Sie das Pellet in der stickstofffreien Nährlösung. Verdünnen Sie die Lösung auf 0,08 bei OD 600.Geben Sie 10 Milliliter ZOA-Lösung zu jeder kompositen Pflanzenkultur hinzu und kultivieren Sie die Pflanze weitere zwei bis drei Wochen, um die Bildung von Knöllchen zu ermöglichen. Entfernen Sie den Sand von den kompositen Pflanzen, indem Sie sie ausgraben und waschen. Überprüfen Sie die transgene Wurzel mittels Expression des grün fluoreszierenden Proteins.Sie verwenden ein Fluoreszenzmikroskop, um dies durchzuführen. Alle unsere Haarwurzel-Konstrukte enthalten eine konstitutive GFP-Kassette zur Selektion transgener Linien. Dieses Bild zeigt transgene chimäre Pflanzen mit Haarwurzeln mit GFP-Signal, die im Fluoreszenzmikroskop beobachtet wurden.Die transgenen Wurzeln mit der intensiveren grünen Fluoreszenz sind leicht von den nicht-transgenen Wurzeln zu unterscheiden. In den Haarwurzeln der kompositen Pflanzen bilden sich Knöllchen aus. Hier ist die vollständige Versuchsanleitung.Auch hier ist die Erzeugung kompositer Haarwurzelpflanzen eine schnelle und einfache Methode, um große Mengen transgenen Gewebes zu erhalten, insbesondere bei Dikot-Pflanzen. Obwohl diese Methode keine transgenen Samen liefert, kann sie innerhalb weniger Wochen transgenes Material hervorbringen. Sie eignet sich besonders gut für Pflanzen, bei denen die Einrichtung einer Gewebekultur und Transformation Schwierigkeiten bereitet.Im Laufe der Jahre haben wir diese Technologie zur Untersuchung von Genfunktionen, Promotorfunktionen, microRNAs, der Entwicklung von Haupt- und Seitenwurzeln, der Abwehr- und Antibiotikastressantwort, der Knöllchenbildung und anderer symbiotischer Prozesse eingesetzt. Wir untersuchten Hormonantworten, metabolomische Profilierungen, Genexpressionsanalysen sowie proteomische Analysen unter Verwendung von höheren kompositen Wurzelpflanzen. Wir hoffen, dass dieses Video Ihnen helfen wird, dieses System auf Ihre bevorzugte Art anzupassen.Sie können uns gerne bei Fragen zu dieser Technologie kontaktieren und viel Erfolg.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein Zelltod-basierter Assay für PTI in Nicotiana benthamiana Pflanzen beschrieben.

Assay für Pathogen-Associated Molecular Pattern (PAMP)-Triggered Immunity (PTI) in Pflanzen

Zwei verschiedene Methoden, um Bildschirm-Anlagen mit Wurzelknoten-Nematoden werden beschrieben. Die beschriebenen Ansätze sind in High-Throughput-Screens mit Nematoden in einer zerstörungsfreien Art und Weise zur Erleichterung der Nutzung dieser Pflanzen in Zuchtprogrammen.

High-und Low Throughput-Screens mit Wurzelknoten-Nematoden Meloidogyne spp.</em

Wachstum von Medicago truncatula Pflanzen in Symbiose mit der Stickstoff-fixierenden Bakterien Sinorhizobium meliloti einzeln steril Mikrokosmen von Standard-Laborplatten ermöglicht häufige Prüfung der Wurzelsysteme und Knötchen, ohne Sterilität. Pflanzen in den Wachstumskammern für bis zu 9 Wochen aufrechterhalten werden.

Einzel-Anlage, steril Mikrokosmen für Knöllchenbildung und des Wachstums der Pflanze Hülsenfrucht<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Mit dem Rhizobia Symbiont<em&gt; Sinorhizobium meliloti</em

Das Ziel ist es, zu veranschaulichen, dass das Modell-Legumino Medicago truncatula leicht verwendet werden kann, um die Regulation der frühen Pflanzenembryogenese zu untersuchen, um das Nicht-Leguminosen-Modell von Arabidopsis zu ergänzen. Die Pod-Morphologie ist mit den Stadien der zygotischen Embryogenese verknüpft, und es wird auch ein Protokoll zur Entnahme von Embryonen mittels Gewebekultur zur Verfügung gestellt.

Protokolle für die Beschaffung Zygotic und somatischen Embryonen zur Untersuchung der Regulation der frühen Embryo-Entwicklung in der Modell-Hülsenfrucht<em&gt; Medicago truncatula</em

Promoter-Expressionsanalysen sind entscheidend für besseres Verständnis der Genregulation und der raumzeitlichen Ausdruck der Zielgene. Hier präsentieren wir ein Protokoll, um zu identifizieren, zu isolieren und zu klonen einen Pflanzen-Promotor. Darüber hinaus beschreiben wir die Charakterisierung des Knötchen-spezifischen Promotors in den gemeinsamen Bohne behaarte Wurzeln.

Pflanzenanalysen Promoter: Identifizierung und Charakterisierung der Root Knoten bestimmten Promoter in die Gartenbohne

Dieses Protokoll bietet experimentelle Schritte und Informationen über Reagenzien, Ausrüstung und Analyse-Tools für Forscher, die gesamte Genom Array-basierte vergleichende genomische Hybridisierung (CGH) Analyse der Kopie Zahl Variationen in interessieren Pflanzen.

Eine Array-basierte Comparative genomische Hybridisierung Plattform für effiziente Erkennung der Kopie Zahl Variationen in schnellen Neutronen induziert Medicago Truncatula Mutanten

Transiente heterologen Expression von biosynthetischen Enzymen in Nicotiana Benthamiana Blätter kann endogene Lieferungen von 2,3-Oxidosqualene auf die Herstellung von qualitativ hochwertigen Triterpene Neuheiten abzulenken. Hierin ist ein detailliertes Protokoll für Rapid (5 Tage) präparative angelegte Produktion von TRITERPENE und Analoga, die unter Verwendung dieser leistungsstarken pflanzlichen Plattform beschrieben.

Transiente Expression in Nicotiana Benthamiana Blätter für Triterpene Produktion im präparativen Maßstab

Dieses Papier beschreibt zwei Methoden zur Quantifizierung von Abwehrreaktionen in Arabidopsis thaliana nach der Exposition gegenüber Immunentfernern: der vorübergehende oxidative Ausbruch und die Hemmung des Sämlingwachstums.

Muster-Triggered Oxidative Burst und Seedling Growth Inhibition Assays in Arabidopsis thaliana

Parasponia andersonii ist ein schnell wachsender tropischer Baum, der zur Cannabis-Familie (Cannabaceae) gehört und in Verbindung mit dem Rhizobium stickstofffixende Wurzelknollen bilden kann. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für reverse genetische Analysen in P. andersonii basierend auf Agrobacterium tumefaciens-vermittelte stabile Transformation und CRISPR/Cas9-basierte Genombearbeitung.

Transforming, GenomEditing und Phenotypisierung der Stickstoff-fixierenden tropischen Cannabaceae Baum Parasponia andersonii

Hier stellen wir das detaillierte Protokoll einer einstufigen Transformationsmethode zur Verfügung, die durch Agrobacterium tumefaciens zur Herstellung von Mischpflanzen vermittelt wird.

Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation

Lernen Sie die Generierung von Composite-Pflanzen mit transgenen Wurzeln in Medicago truncatula für Nodulationsstudien. Diese Agrobacterium-basierte Methode ermöglicht schnelle Analysen von Genfunktionen.

Generierung von Composite-Anlagen in Medicago truncatula Für Nodulation Assays verwendet

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