Name: Chromatin Immunopräzipitation-Assay für Tissue-spezifische Gene mit Frühzeitige muriner Embryonen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-29T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Lernen Sie die Chromatin-Immunopräzipitation für die Analyse gewebespezifischer Gene in murinen Embryonen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Protein-DNA-Interaktionen während der embryonalen Entwicklung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde vom NIH R01 GM56244 zu ANI, die Gelder durch den American Recovery and Reinvestment Act of 2009 ausgezeichnet umfasst, und durch den NIH R01 GM87130 zu Jarp

1. Isolierung von Embryonen Hinweis: Sämtliche Geschäfte mit Mäusen sollten in Übereinstimmung mit den entsprechenden Tierpflege und Nutzungsrichtlinien und Protokolle durchgeführt werden <ol><li> Überprüfen Sie das Vorhandensein eines passenden Stecker in die Buchse Maus am Morgen nach der Paarung und Trennung der begatteten Weibchen aus dem Deckrüden, indem man sie in einem anderen Käfig. Noon der Tag, an dem Gegenstecker beobachtet wird, gilt als Embryonaltag 0,5 (E0.5) der Entwicklung. </li><li> An E8.5 (oder die gewünschte Stufe, falls abweichend), Opfer der Maus mit einem genehmigten Protokoll. </li><li> Wet den Bauch des Tieres eingeschläfert mit 70% Ethanol und öffnen Sie die Bauchhöhle. Die Implantation Seiten auf das Vorhandensein von Embryonen sind als "Perlen auf einer Schnur" Anordnung entlang der Länge der einzelnen Uterushorn (Abbildung 1A) gesehen. Mit einer Schere, entfernen Sie beide Uterushörner, schneiden Sie jeden Implantationsstelle einzeln zu trennen (Abbildung 1B) und legen Sie sie in eine 100 mm Petrischale mit Raumtemperatur (RT) Dissektion (DMEM, 10% fötalem Rinderserum, 20 mM HEPES pH 7,4 , 60 pg / ml Penicillin, 2 mM Streptomycin). </li><li> Mit einer Pinzette entfernen jedem Embryo und dem umgebenden Membranen aus dem Uterus-Gewebe (Abbildung 1C) und legen Sie sie in frische Dissektion Medium. </li><li> Isolieren einzelner Embryonen unter einem Binokular mit einer Pinzette. In diesem Stadium in der Entwicklung werden die Embryonen durch die parietalen Dottersack, die Kontakte der deciduum Gewebe, das viszerale Dottersack und Amnion. Umgeben Das Amnion ist eine transparente Membran, die in direktem Kontakt mit dem Embryo. Die viszerale Dottersack liegt zwischen dem Amnion und der parietalen Dottersack und ist leicht in E8.5-E9.5 Embryonen durch die Anwesenheit von prominenten Blutgefäße, die den Embryo ernähren zu unterscheiden. Nehmen Sie jedes Embryo aus den umliegenden Membranen und Transfer individuell in eine neue Platte mit Dissektion Medien, um überschüssiges Blut zu entfernen. Die Entwicklungsphase kann vom Embryo zum Embryo und zwischen den Würfen variieren; Vertreter E8.5 Embryonen und ein Vertreter E9.5 Embryonen sind in Abbildung 1D gezeigt. </li><li> Übertragen Sie jede Embryo zu einem 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen mit 200 ul der Dissektion Medien (beschrieben in Schritt 4 oben). </li></ol> 2. Homogenisierung der isolierten Embryo <ol><li> Fügen Sie 20 Einheiten Collagenase Typ II in einem Volumen von 200 ul (verdünnt in 1X Dubbecco die Phosphate Buffered Saline; DPBS) zu jedem Eppendorf-Röhrchen. </li><li> Schütteln Sie Proben in einem 37 ° C Schüttler bei 100 rpm für 20 min. </li><li> Resuspendieren und durch Pipettieren zu Klumpen von Zellen zu zerstören. </li><li> Übernehmen Sie die Zellsuspension auf der Oberseite des sterilen Zellsieb (40 um Maschenweite) über ein 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen gegeben. </li><li> Unmittelbar gelten 600 ul der Raumtemperatur 1X DPBS am oberen Rand der Zelle Sieb, um die Trennung zu vervollständigen. Entsorgen Sie das Sieb. </li><li> Centrifuge Proben bei 4 ° C bei 4000 xg für 5 min. </li><li> Überstand verwerfen. </li><li> Das Pellet in 1 ml RT 1X DPBS. </li><li> Zentrifugieren Sie die Proben bei 4000 xg für 1 min bei RT. </li><li> Überstand verwerfen. </li><li> Das Pellet in 200 ul RT Dissektion Medien. </li><li> Zählen Sie die embryonalen Zellen. Es ist ein durchschnittliches 3-5 x 10 6 cells/E8.5 Embryo. </li></ol> 3. Cross-Link Chromatin <ol><li> Add 5,6 ul 37% Formaldehyd, die 200 ul Proben für eine Endkonzentration von 1% Formaldehyd. </li><li> Inkubieren Proben für 10 min bei RT. </li><li> Zentrifugieren Sie die Proben bei 4 ° C bei 4000 xg für 3 min. </li><li> Überstand verwerfen. </li><li> Resuspendieren der Zellen mit kaltem 1X DPBS mit 80 ul / ml Protease-Inhibitor-Cocktail (PIC). </li><li> Centrifuge Proben bei 4 ° C bei 4000 xg für 3 min. </li><li> Überstand verwerfen. In diesem Schritt können die Proben bei -80 ° C eingefroren werden Die gefrorenen, vernetzten Proben sind über mehrere Monate stabil. </li></ol> 4. Beschallung <ol><li> Zellpellet in 100 ul RT SDS Lysepuffer (50 mM Tris-HCl (pH 8,1), 10 mM EDTA und 1% SDS mit frisch hinzu PIC bei 1 ul ul PIC/800 Gesamtvolumens). Wenn resuspendiert, fügen Sie eine zusätzliche 100 ul RT SDS Lysepuffer Resuspension zu fördern. Gut mischen durch Pipettieren und Inversion. </li><li> Inkubieren Sie die Zellsuspension auf Eis für 10 min. </li><li> Ultraschallbad lysierten Zellen zu scheren DNA zwischen 200 und 500 Basenpaaren mit einem Diagenode Bioruptor ™ UCD200 (5 min x 8 Mal: ​​Einstellung der Amplitude von 30 sec on/30 sec off auf hohe (320 Watt) Leistung). Die Proben sollten durch eine Eisbrei umgeben sein. Lassen Sie die Proben auf über 4 ° C warm oder zu frieren. Es gibt viele Arten von sonicators zur Verfügung. Beschallung Bedingungen sollten für jeden Sonicator optimiert werden, um in das Scheren des vernetzten DNA auf einer Länge von ca. 500 bp ergeben. </li><li> Centrifuge beschallt Proben bei 4 ° C bei 14000 xg für 10 min. </li><li> Transfer der Überstand in ein frisches Eppendorf-Röhrchen auf Eis vorgekühlt. </li><li> Teilen Sie die beschallte Probe in maximal 5 Portionen. Wir haben empirisch festgestellt, dass eine E8.5 Embryonen in 5 Aliquots aufgeteilt werden kann. Kleinere oder größere Probenmengen kann entsprechend skaliert werden. Bei diesem Schritt kann die Probe bei -80 ° C gelagert werden bis zur weiteren Verwendung. </li><li> Reserve ein Aliquot für die Verwendung als Eingang und bei -20 ° C bis Schritt 6, wenn das Cross-Links aufgelöst werden. Verdünnen Sie die anderen Aliquots 10-fach in ChIP-Verdünnungspuffer (16,7 mM Tris-HCl (pH 8,1), 1,2 mM EDTA, 1,1% Triton X-100, 167 mM NaCl und 0,01% SDS) mit frisch hinzu PIC bei 1 μl/800 ul Puffer. </li></ol> 5. Pre-Clearing-und Immunpräzipitation <ol><li> Pre-clear die verdünnte Überstand mit 75 ul Lachs-Sperma DNA / Protein A oder G Agarose-50% Gülle bei 4 ° C, mit der Rotation für 1 Stunde. Verwenden Sie entweder Protein A oder Protein G Kügelchen durch den Antikörper für die Chip verwendet werden bestimmt sein sollte. Zum Beispiel sind Protein-A-Perlen für Kaninchen-Antikörper empfohlen, während Protein G Kügelchen für Ziegen-Antikörper oder Maus IgG 1-Antikörper empfohlen. Nähere Informationen finden Sie unter den Empfehlungen der Raupe Herstellers. </li><li> Zentrifuge bei 4 ° C bei 2500 xg für 1 min. </li><li> Übertragen Sie den Überstand auf eine neue, vorgekühlte Eppendorf-Röhrchen. </li><li> Add-Antikörper (4 pg / Probe), die bereits geklärten Aliquot und inkubieren Nacht bei 4 ° C mit Rotation. </li></ol> 6. Das Waschen des Chromatin-Protein-Bead-Komplex <ol><li> Add 60 ul Salmon Sperm DNA / Protein A oder G-Agarose Suspension in jedes Fläschchen und inkubieren Sie bei 4 ° C mit Rotation für 1 Stunde. Verwenden Sie die gleiche Art Wulst für Pre-Clearing im obigen Schritt 3 verwendet. </li><li> Zentrifuge bei 4 ° C bei 1000 xg für 1 min. </li><li> Entfernen Sie vorsichtig den Überstand und entsorgen. Halten Sie die DNA-Protein-Bead-Komplex auf dem Eis. </li><li> Resuspendieren und waschen das Pellet wie unten mit Waschpuffer 1, 2 gerichtet, 3 und 4. Wash-Puffer 1-3 gekühlt bis 4 ° C und Waschen mit dieser Puffer bei 4 durchgeführt werden sollte ° C. Waschpuffer 4 sollte bei Raumtemperatur und wäscht mit diesem Puffer werden sollte bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Jeder waschen für 5 Minuten mit einer Rotation bei der entsprechenden Temperatur. Nach jedem Waschen, Zentrifuge bei 4 ° C (Raumtemperatur Waschpuffer 4 Waschgänge) bei 1000 xg für 1 min, dann vorsichtig absaugen oder entfernen Sie den Überstand. </li></ol> Puffer 1: Low Salz Waschpuffer (20 mM Tris-HCl (pH 8,1), 2 mM EDTA, 1% Triton X-100, 150 mM NaCl und 0,1% SDS), 1 ml x 2 Wäschen. Buffer 2: High Salz Waschpuffer (20 mM Tris-HCl (pH 8,1), 2 mM EDTA, 1% Triton X-100, 500 mM NaCl und 0,1% SDS), 1 ml x 2 Wäschen. Buffer 3: LiCl Salz Waschpuffer (10 mM Tris-HCl (pH 8,1), 1 mM EDTA, 1% IGEPAL-CA630, 0,25 M LiCl und 1% Desoxycholsäure (Natriumsalz)), 1 ml x 1 zu waschen. Buffer 4: TE-Puffer (10 mM Tris-HCl (pH 8,1), 1 mM EDTA), 1 ml x 2 Wäschen. 7. Die Elution der Chromatin-Antikörper-Komplex <ol><li> Resuspendieren gewaschen Chromatin-Protein-Bead-Komplex in 250 ul frisch zubereiteten Elutionspuffer (1% SDS, 0,1 M NaHCO 3). Kräftig Wirbel der Probe für 5 Sekunden, dann bei RT für 15 min mit Rotation inkubiert. </li><li> Zentrifuge bei 2500 xg für 1 min bei RT und übertragen Sie die Eluat in ein neues Eppendorf-Röhrchen. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 1 und 2 und die Eluate miteinander kombinieren in der gleichen Eppendorf-Röhrchen. Die Eluate sollte bei Raumtemperatur aufbewahrt werden. Nach Abschluss dieser Schritt kann die Eluate bei -20 ° C bis zur weiteren Verwendung gespeichert werden. </li></ol> 8. Reverse-Cross-Link und Recover DNA <ol><li> Fügen Sie 20 ul 5 M NaCl für 500 ul Eluat (40 ul / ml für die Eingabe-Steuerung). </li><li> Erhitzen Sie die Eluate bei 65 ° C im Wasserbad für 4 h bis über Nacht. </li><li> 10 &amp;mgr; l jeder Probe (einschließlich der Eingabe-Steuerung) kann auf einem 2% Agarosegel neben Größenmarkern Spanning 0,1 bis 1 kbp der DNA-Fragmentgröße Prüfung ausgeführt wird. Die DNA wird als ein Abstrich erscheinen und nicht eine scharfe Bande. Der Rest der Proben bei 65 belassen werden ° C, während das Gel läuft. </li><li> Wiederherstellen der DNA aus jeder Probe mit Hilfe eines QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen). Add 600 ul Puffer QG (im Lieferumfang des Kits) zur DNA-Adsorption mit der Silica-Membran in einer QIAquick Spin-Säule und 200 ul Isopropanol in einem 500 ul Probe zu optimieren. Beachten Sie, dass QG Puffer ein pH-Indikator ermöglicht eine einfache Bestimmung des pH-Wertes der Probe enthält. Wenn die Farbe der Probe von gelb bis violett (pH&gt; 7,5) nach dem Mischen, fügen Sie 10 ul 3 M NaAcetate (pH 5,2) auf die Probe und mischen. Dies reduziert den pH-Wert der Mischung auf DNA-Bindung an die Perlen in der Spalte zu maximieren. </li><li> Vor dem Beladen der Säule, prüfen Sie die Mischung, um festzustellen, ob eine SDS Niederschlag vorhanden ist. Wenn SDS Niederschläge aufgetreten ist, sollte die Probe in einem erwärmt werden42 ° C Wasserbad, bis der Niederschlag verschwindet. </li><li> Legen Sie 700 ul der Mischung in die QIAquick Spin-Säule (lila Säule im Kit) und Zentrifuge bei RT bei 14000 xg für 1 min. Verwerfen Sie den Durchfluss durch aus der Säule, bevor Sie fortfahren und wiederholen Sie diesen Schritt mit dem Rest der Probe. </li><li> Add 500 ul QG Puffer auf die Säule zu waschen. Zentrifuge bei RT bei 14000 xg für 2 min. Verwerfen Sie den Durchfluss durch aus der Säule, bevor Sie fortfahren. </li><li> Die Säule wird mit 700 ul PE Waschpuffer (im Lieferumfang des Kits), auf die Ethanol wurde hinzugefügt, wie vom Hersteller angewiesen. Zentrifuge bei RT bei 14000 xg für 1 min. Verwerfen Sie den Durchfluss durch aus der Säule, bevor Sie fortfahren. </li><li> Wiederholen Sie den Zentrifugationsschritt vollständig zu entfernen den Rest der PE-Puffer von der Säule. Verwerfen Sie den Durchfluss durch und das Sammelrohr. </li><li> Eluieren DNA aus der Säule in ein frisches Eppendorf-Röhrchen durch Zugabe von 60 ul EB-Puffer (Elutionspuffer im Kit mitgeliefert). </li><li> Zentrifuge bei Raumtemperatur bei 14000 xg für 1 min. Die eluierte DNA kann bei -20 ° C bis zur Erkennung gespeichert werden. A 260 Lesungen des gewonnenen Materials in der Regel weisen Konzentrationen von 90-120 ng / ul, für eine vollständige Erholung von ~ 6-7 ug pro Aliquot. Allerdings ist das A 260/280 Ratio dieser Proben in der Regel&gt; 1,8, was darauf hindeutet, dass RNA in der Probe vorhanden ist. So ist die genaue Menge der verwerteten DNA kann niedriger sein. </li></ol> 9. Die Analyse der DNA Recovered <ol><li> SDS kann mit der Aktivität der Taq-Polymerase PCR stören. SDS sollte vollständig, bevor PCR entfernt werden. Inkubieren Sie die DNA auf Eis zu fällen restliche SDS und Zentrifuge bei 4 ° C bei 14000 xg für 1 min. Übertragen Sie den Überstand in ein neues Eppendorf tube.This Schritt wird dringend empfohlen. </li><li> Die DNA-Eluate kann entweder durch konventionelle PCR oder durch quantitative real-time PCR (Q-PCR) mit Primern spezifisch für jede zu analysierende Sequenz erkannt werden. 10.05 ul von Gesamt-DNA-Eluat kann für eine PCR oder Q-PCR-Reaktion verwendet werden. PCR mit dem Eingang Steuerung kann mit einer 5-10 fachen Verdünnung der DNA verglichen mit der Menge der anderen Proben durchgeführt werden. PCR-und Q-PCR-Bedingungen variieren, erfordert jedoch die begrenzte Menge an Ausgangsmaterial zusätzliche PCR-Zyklen. Für die konventionelle PCR-Nachweis, empfehlen wir, beginnend mit 40 Zyklen und Anpassung wie nötig. </li></ol> 10. Repräsentative Ergebnisse Wir haben dieses Protokoll verwendet, um ChIP von beiden E8.5 und E9.5 Embryonen (Abbildung 2) durchzuführen. Die Ergebnisse zeigen, dass Myogenin auf dem Myogenin Promotor in E8.5 und E9.5 Embryonen ist. ChIP gereinigt DNAs wurden durch konventionelle PCR (Abbildung 2A) und durch quantitative real-time PCR (Abbildung 2B) analysiert. Im Gegensatz dazu gab es keine Anzeichen von Myogenin Bindung an die Myogenin Promotor in den Dottersack, wo Myogenin nicht exprimiert wird. Die Interferon-γ (IFN &amp;ggr;)-Promotor, die Sequenzen passend zum Myogenin Bindungsstelle enthält, wurde als negative Ablaufsteuerung eingesetzt. Wie erwartet, war Myogenin nicht auf die IFNy Promotor in jeder der Gewebeproben getestet gebunden. , Die die Vorläufer der Skelettmuskulatur sind; In E8.5 und 9,5 Embryonen ist Myogenin speziell in den Somiten (6,10 Abb. 3) ausgedrückt. So die Ergebnisse zeigen, dass Myogenin die Myogenin Promotor in der Somiten bei E8.5 und E9.5 gebunden ist. <img src="/files/ftp_upload/2677/2677fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. E8.5 Embryonen Dissektion. (A) Isolierte Uterushorn (oben; höherer Vergrößerung im unteren Bereich, gezeigt). (B) Uterushorn mit einer Schere schneiden auch auf individuellen Nidationsstellen mit einzelnen Embryonen zu trennen. (C) Embryonen ragt aus uterine Gewebe während der Präparation. Pfeile markieren Embryonen noch von extra-embryonalen Gewebe bedeckt. (D) Zwei E8.5 Embryonen aus dem gleichen Wurf. Der Embryo auf der linken Seite hat nicht den Prozess der Umwandlung begonnen. Der Embryo auf der rechten Seite wird derzeit dreht. Ganz rechts - Vertreter E9.5 Embryonen. <img src="/files/ftp_upload/2677/2677fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. ChIP-Assay demonstriert Myogenin Bindung an die Myogenin Promotor in E8.5 und E9.5 Embryonen. (Top) Konventionelle PCR-Analyse von 5 ul der DNA von Chip-Experimente mit einem Myogenin Antikörper oder unspezifische IgG wurde mit Primern, die einen Teil der Myogenin Förderer von -79 bis +69 relativ zum Start der Transkription verstärken durchgeführt gereinigt, dass enthält eine Myogenin Bindungsstelle bei -12 oder Primer, dass ein Teil der IFNy Promotor, der eine Sequenz passend zum Myogenin Bindungsstelle befindet ~ 1075 bp stromaufwärts von der Transkriptions-Startstelle enthält verstärken entfernt. Die IFNy Primersequenzen verwendet wurden 5'-GCT GAC TCA AGA CCC CGA GGC-3 'und 5'-TGA GGA GGC TGG AGG AGG CC-3'. (Bottom) Quantitative Real-time PCR-Analyse der gleichen Proben in (A) verwendet. DieStandardabweichung - Daten werden als% des Eingangs + / aufgetragen. <img src="/files/ftp_upload/2677/2677fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Myogenin ist speziell in den Somiten von E8.5 und E9.5 Embryonen geäußert. Whole mount in situ Hybridisierung von Myogenin zeigt spezifische mRNA-Expression in den Somiten. Größe bar in E8.5 Bild - 200 um. Größe bar in E9.5 Bild - 500 um.

<ol><li>Minard, M. E., Jain, A. K., Barton, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+epigenetic+alterations+to+chromatin+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Analysis of epigenetic alterations to chromatin during development.</a> Genesis. 47, 559-572 (2009).</li>
<li>Kuo, M. H., Allis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cross-linking+and+immunoprecipitation+for+studying+dynamic+Protein%3ADNA+associations+in+a+chromatin+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo cross-linking and immunoprecipitation for studying dynamic Protein:DNA associations in a chromatin environment.</a> Methods. 19, 425-433 (1999).</li>
<li>Johnson, K. D., Bresnick, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+long-range+transcriptional+mechanisms+by+chromatin+immunoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Dissecting long-range transcriptional mechanisms by chromatin immunoprecipitation.</a> Methods. 26, 27-36 (2002).</li>
<li>Yusuf, F., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+eventful+somite%3A+patterning%2C+fate+determination+and+cell+division+in+the+somite%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The eventful somite: patterning, fate determination and cell division in the somite.</a> Anat Embryol (Berl). 211, Suppl 1. 21-30 (2006).</li>
<li>Buckingham, M., Bajard, L., Chang, T., Daubas, P., Hadchouel, J., Meilhac, S., Montarras, D., Rocancourt, D., Relaix, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+formation+of+skeletal+muscle%3A+from+somite+to+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">The formation of skeletal muscle: from somite to limb.</a> J Anat. 202, 59-68 (2003).</li>
<li>Wright, W. E., Sassoon, D. A., Lin, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenin%2C+a+factor+regulating+myogenesis%2C+has+a+domain+homologous+to+MyoD%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Myogenin, a factor regulating myogenesis, has a domain homologous to MyoD.</a> Cell. 56, 607-617 (1989).</li>
<li>Edmondson, D. G., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+with+homology+to+the+myc+similarity+region+of+MyoD1+is+expressed+during+myogenesis+and+is+sufficient+to+activate+the+muscle+differentiation+program%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A gene with homology to the myc similarity region of MyoD1 is expressed during myogenesis and is sufficient to activate the muscle differentiation program.</a> Genes Dev. 3, 628-640 (1989).</li>
<li>Nabeshima, Y., Hanaoka, K., Hayasaka, M., Esumi, E., Li, S., Nonaka, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenin+gene+disruption+results+in+perinatal+lethality+because+of+severe+muscle+defect%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myogenin gene disruption results in perinatal lethality because of severe muscle defect.</a> Nature. 364, 532-535 (1993).</li>
<li>Hasty, P., Bradley, A., Morris, J. H., Edmondson, D. G., Venuti, J. M., Olson, E. N., Klein, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+deficiency+and+neonatal+death+in+mice+with+a+targeted+mutation+in+the+myogenin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Muscle deficiency and neonatal death in mice with a targeted mutation in the myogenin gene.</a> Nature. 364, 501-506 (1993).</li>
<li>Sassoon, D., Lyons, G., Wright, W. E., Lin, V., Lassar, A., Weintraub, H., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+two+myogenic+regulatory+factors+myogenin+and+MyoD1+during+mouse+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Expression of two myogenic regulatory factors myogenin and MyoD1 during mouse embryogenesis.</a> Nature. 341, 303-307 (1989).</li>
<li>Brennan, T. J., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenin+resides+in+the+nucleus+and+acquires+high+affinity+for+a+conserved+enhancer+element+on+heterodimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Myogenin resides in the nucleus and acquires high affinity for a conserved enhancer element on heterodimerization.</a> Genes Dev. 4, 582-595 (1990).</li>
<li>Rosenthal, N., Berglund, E. B., Wentworth, B. M., Donoghue, M., Winter, B., Bober, E., Braun, T., Arnold, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+conserved+enhancer+downstream+of+the+human+MLC1%2F3+locus+is+a+target+for+multiple+myogenic+determination+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A highly conserved enhancer downstream of the human MLC1/3 locus is a target for multiple myogenic determination factors.</a> Nucleic Acids Res. 18, 6239-6246 (1990).</li>
<li>Braun, T., Gearing, K., Wright, W. E., Arnold, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baculovirus-expressed+myogenic+determination+factors+require+E12+complex+formation+for+binding+to+the+myosin-light-chain+enhancer%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Baculovirus-expressed myogenic determination factors require E12 complex formation for binding to the myosin-light-chain enhancer.</a> Eur J Biochem. 198, 187-193 (1991).</li>
<li>Chakraborty, T., Brennan, T., Olson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+trans-activation+of+a+muscle-specific+enhancer+by+myogenic+helix-loop-helix+proteins+is+separable+from+DNA+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Differential trans-activation of a muscle-specific enhancer by myogenic helix-loop-helix proteins is separable from DNA binding.</a> J Biol Chem. 266, 2878-2882 (1991).</li>
<li>French, B. A., Chow, K. L., Olson, E. N., Schwartz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterodimers+of+myogenic+helix-loop-helix+regulatory+factors+and+E12+bind+a+complex+element+governing+myogenic+induction+of+the+avian+cardiac+alpha-actin+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Heterodimers of myogenic helix-loop-helix regulatory factors and E12 bind a complex element governing myogenic induction of the avian cardiac alpha-actin promoter.</a> Mol Cell Biol. 11, 2439-2450 (1991).</li>
<li>Brennan, T. J., Chakraborty, T., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenesis+of+the+myogenin+basic+region+identifies+an+ancient+protein+motif+critical+for+activation+of+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mutagenesis of the myogenin basic region identifies an ancient protein motif critical for activation of myogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 5675-5679 (1991).</li>
<li>Lassar, A. B., Davis, R. L., Wright, W. E., Kadesch, T., Murre, C., Voronova, A., Baltimore, D., Weintraub, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+activity+of+myogenic+HLH+proteins+requires+hetero-oligomerization+with+E12%2FE47-like+proteins+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Functional activity of myogenic HLH proteins requires hetero-oligomerization with E12/E47-like proteins in vivo.</a> Cell. 66, 305-315 (1991).</li>
<li>Chakraborty, T., Brennan, T. J., Li, L., Edmondson, D., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inefficient+homooligomerization+contributes+to+the+dependence+of+myogenin+on+E2A+products+for+efficient+DNA+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Inefficient homooligomerization contributes to the dependence of myogenin on E2A products for efficient DNA binding.</a> Mol Cell Biol. 11, 3633-3641 (1991).</li>
<li>Cserjesi, P., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenin+induces+the+myocyte-specific+enhancer+binding+factor+MEF-2+independently+of+other+muscle-specific+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Myogenin induces the myocyte-specific enhancer binding factor MEF-2 independently of other muscle-specific gene products.</a> Mol Cell Biol. 11, 4854-4862 (1991).</li>
<li>Braun, T., Arnold, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+four+human+muscle+regulatory+helix-loop-helix+proteins+Myf3-Myf6+exhibit+similar+hetero-dimerization+and+DNA+binding+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The four human muscle regulatory helix-loop-helix proteins Myf3-Myf6 exhibit similar hetero-dimerization and DNA binding properties.</a> Nucleic Acids Res. 19, 5645-5651 (1991).</li>
<li>Serna, dela, L, I., Ohkawa, Y., Berkes, C. A., Bergstrom, D. A., Dacwag, C. S., Tapscott, S. J., Imbalzano, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MyoD+targets+chromatin+remodeling+complexes+to+the+myogenin+locus+prior+to+forming+a+stable+DNA-bound+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">MyoD targets chromatin remodeling complexes to the myogenin locus prior to forming a stable DNA-bound complex.</a> Mol Cell Biol. 25, 3997-4009 (2005).</li>
<li>Blais, A., Tsikitis, M., Acosta-Alvear, D., Sharan, R., Kluger, Y., Dynlacht, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+initial+blueprint+for+myogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">An initial blueprint for myogenic differentiation.</a> Genes Dev. 19, 553-569 (2005).</li>
<li>Cao, Y., Kumar, R. M., Penn, B. H., Berkes, C. A., Kooperberg, C., Boyer, L. A., Young, R. A., Tapscott, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+gene-specific+analyses+show+distinct+roles+for+Myod+and+Myog+at+a+common+set+of+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Global and gene-specific analyses show distinct roles for Myod and Myog at a common set of promoters.</a> EMBO J. 25, 502-511 (2006).</li>
<li>Ohkawa, Y., Yoshimura, S., Higashi, C., Marfella, C. G., Dacwag, C. S., Tachibana, T., Imbalzano, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenin+and+the+SWI%2FSNF+ATPase+Brg1+maintain+myogenic+gene+expression+at+different+stages+of+skeletal+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Myogenin and the SWI/SNF ATPase Brg1 maintain myogenic gene expression at different stages of skeletal myogenesis.</a> J Biol Chem. 282, 6564-6570 (2007).</li>
<li>Davie, J. K., Cho, J. H., Meadows, E., Flynn, J. M., Knapp, J. R., Klein, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target+gene+selectivity+of+the+myogenic+basic+helix-loop-helix+transcription+factor+myogenin+in+embryonic+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Target gene selectivity of the myogenic basic helix-loop-helix transcription factor myogenin in embryonic muscle.</a> Dev Biol. 311, 650-664 (2007).</li>
<li>Metivier, R., Penot, G., Hubner, M. R., Reid, G., Brand, H., Kos, M., Gannon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor-alpha+directs+ordered%2C+cyclical%2C+and+combinatorial+recruitment+of+cofactors+on+a+natural+target+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor-alpha directs ordered, cyclical, and combinatorial recruitment of cofactors on a natural target promoter.</a> Cell. 115, 751-763 (2003).</li>
<li>Ausubel, F. M., Brent, R., Kingston, R. E., Moore, D. D., Seidman, J. G., Smith, J. A., Struhl, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAusubel%2C+FM+%22Current+Protocols+in+Molecular+Biology%22">Current Protocols in Molecular Biology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2010).</li>
</ol>

Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften her von der University of Massachusetts Medical School IACUC gesetzt durchgeführt.

In der beschriebenen ChIP-Protokoll zeigen wir, dass die myogene Regler Myogenin mit dem Myogenin Promotor in der Skelettmuskulatur Vorläuferzellen Gewebe in einzelne E8.5 und E9.5 Embryonen verbunden ist. Frühere Studien haben ausführlich Myogenin Bindung an E-Box enthält Sequenzen aus, beginnend mit dem ersten in vitro Gel-Shift-Experimente unter Verwendung in vitro übersetzt oder bakteriell produzierten Myogenin und radioaktiv markierten DNA-Codierung der relevante Teil der Zielgen regulatorische Se...

<table><tbody><tr><td>ChIP-Assay-Kit</td><td>Upstate, Millipore</td><td>17-295</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase Typ II</td><td>Invitrogen</td><td>17101015</td><td>Verdünnung mit 1 x PBS</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s modifiziertes Eagle-Medium (DMEM)</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>12100-061</td><td>Hoher Glucosespiegel</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung 1X (DPBS)</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>14190-144</td><td>Ohne Calciumchlorid, ohne Magnesiumchlorid</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Gel-Extraktionskit</td><td>QIAquick</td><td>28704</td><td>50-Reaktions-Kit</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin-Stammlösung</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td></td><td>Konzentration von 5000 &amp;#x03BC;g/ml</td></tr><tr><td>Protease-Inhibitor-Cocktail</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>Lachssperma-DNA / Protein A-Agarose</td><td>EMD Millipore</td><td>16-157</td><td></td></tr><tr><td>Myogenin-Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-576</td><td></td></tr><tr><td>Normales Kaninchen-IgG</td><td>EMD Millipore</td><td>12-370</td><td></td></tr><tr><td>Platinum PCR Supermix</td><td>Invitrogen</td><td>11306-016</td><td></td></tr><tr><td>GoTaq Q-PCR-Mastermix</td><td>Promega Corp.</td><td>A6001</td><td></td></tr></tbody></table>

chromatin immunopräzipitation-assay für tissue-spezifische gene mit frühzeitige muriner embryonen

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) ist ein leistungsfähiges Werkzeug, um Protein zu identifizieren: Chromatin-Wechselwirkungen, die im Kontext von lebenden Zellen 1-3 auftreten. Diese Technik wurde in großem Umfang in Gewebekulturzellen ausgebeutet und in geringerem Maße, in primärem Gewebe. Die Anwendung des ChIP mit Nagetier-embryonalen Gewebe, insbesondere in den frühen Zeiten der Entwicklung ist durch die begrenzte Menge an Gewebe und die Heterogenität der Zell-und Gewebetypen des Embryos kompliziert. Hier präsentieren wir eine Methode, um ChIP durchführen mit einem dissoziierten Embryonaltag 8,5 (E8.5) Embryo. Geschert Chromatin aus einem einzigen Embryo E8.5 können unterteilt werden in bis zu fünf Portionen, die die Ermittler genügend Material ermöglicht Kontrollen und für die Untersuchung von spezifischen Protein: Chromatin-Wechselwirkungen. Wir haben diese Technik genutzt, um zu beginnen, um Protein-Dokument: Chromatin-Wechselwirkungen bei der Spezifikation von Gewebe-spezifischen Genexpression Programme. Die Heterogenität der Zelltypen im Embryo notwendig schränkt die Anwendung dieser Technik, weil das Ergebnis ist der Nachweis von Protein: Chromatin-Wechselwirkungen ohne Unterscheidung, ob die Wechselwirkungen treten in allen, eine Teilmenge von oder einem Zelltyp (s). Allerdings ist die Untersuchung von Gewebe-spezifischer Gene während oder nach dem Einsetzen der Gewebe-spezifische Genexpression möglich aus zwei Gründen. Zunächst Immunpräzipitation von gewebespezifischen Faktoren nicht unbedingt isoliert Chromatin aus dem Zelltyp, wo der Faktor ausgedrückt. Zweitens sollte Immunpräzipitation von Ko-Aktivatoren und Histonen mit post-translationale Modifikationen, die mit Gen-Aktivierung assoziiert sind nur bei Genen und Genprodukten regulatorische Sequenzen in die Zelle Typ, bei dem das Gen wird gefunden werden oder wurde aktiviert. Die Technik sollte für das Studium der meisten Gewebe-spezifische Genaktivierung Veranstaltungen. Im Beispiel unten beschrieben, verwendeten wir E8.5 und E9.5 Maus-Embryonen zu Faktor Bindung an ein Skelettmuskel spezifischen Gen-Promotor zu untersuchen. Somiten, die eine Vorstufe Gewebe, aus denen die Skelettmuskeln des Rumpfes und der Gliedmaßen bilden, sind an E8.5-9.5 4,5 präsentieren. Myogenin ist ein regulierender Faktor für die Skelettmuskulatur Differenzierung 6-9 erforderlich. Die Daten zeigen, dass Myogenin mit seinen eigenen Promotor in E8.5 und E9.5 Embryonen verbunden ist. Da Myogenin ist nur in Somiten in diesem Stadium der Entwicklung 6,10 ausgedrückt, zeigen die Daten, die Myogenin Interaktionen mit ihren eigenen Promotor haben bereits in der Skelettmuskulatur Vorläuferzellen in E8.5 Embryonen aufgetreten.

Wir zeigen eine Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP)-Methode, um Wechselwirkungen zwischen Faktoren bei Gewebe-spezifische Gene während oder nach dem Einsetzen der Gewebe-spezifische Gen-Expression in embryonalen Maus-Gewebe zu identifizieren. Dieses Protokoll sollte allgemein anwendbar für die Untersuchung von Gewebe-spezifische Genaktivierung, wie es während der normalen Embryonalentwicklung auftritt.

Chromatin Immunopräzipitation-Assay für Tissue-spezifische Gene mit Frühzeitige muriner Embryonen

Die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) ist ein leistungsfähiges Instrument zur Identifizierung von Protein-Chromatin-Interaktionen, die im Kontext lebender Zellen auftreten 1-3. Dies ...

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, E 8,5-Maus-Embryonen für die Verwendung in Chromatin-, Immunpräzipitations- oder Chip-Assays zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Maus-Embryonen isoliert und Einzelzell-Suspensionen hergestellt werden. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, DNA-gebundene Proteine chemisch an die genomische DNA zu vernetzen, gefolgt von einer Beschallung zur Fragmentierung der DNA. Der dritte Schritt des Verfahrens besteht darin, Protein-Chromatin-Komplexe immunpräzipitieren zu lassen und gereinigte DNA zu isolieren. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Analyse der gereinigten, immunpräzipitierten DNA mittels konventioneller PCR oder quantitativer Echtzeit-PCR. Letztendlich können Ergebnisse erhalten werden, die Proteininteraktionen mit regulatorischen Sequenzen differenzierungsspezifischer Gene während der Initiierung des Differenzierungsprogramms in sich entwickelnden Geweben und Organen zeigen.Dieses Semester kann helfen, wichtige Fragen über die Initiation von Differenzierungsprogrammen während der Embryogenese zu beantworten, indem regulatorische Faktoren identifiziert werden, die mit den regulatorischen Sequenz

chromatin-immunoprecipitation-assay-for-tissue-specific-genes-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Differenzierung der ESC deckt sich mit Zelltyp-spezifische Veränderungen in der Struktur und Zusammensetzung des Chromatins. Der Nachweis dieser Veränderungen bietet wertvolle Einblicke in die Mechanismen, die stemcellness und der Zelldifferenzierung zu definieren. Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) stellt eine wertvolle Methode, um die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen Stammzell-Differenzierung zu sezieren.

Chromatin Immunopräzipitation von humanen embryonalen Stammzellen

Die Frage, wie Chromatin Regulierungsbehörden und Chromatin-Staaten betreffen das Genom in vivo ist der Schlüssel zum Verständnis, wie frühe Zellschicksal Entscheidungen werden in den sich entwickelnden Embryo gemacht. ChIP-Seq-die beliebteste Ansatz zur Chromatin Funktionen auf globaler Ebene, wird hier für Xenopus Embryonen beschrieben untersuchen.

Genomweite Snapshot von Chromatin Regulierungsbehörden und Staaten in<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonen von ChIP-Seq

Wir demonstrieren eine Methode zur Transplantation von kultivierten Zellen in definierte Stellen von frühen Mausembryonen, um ihr in vivo Potenzial zu bestimmen. Wir stellen auch eine optimierte Elektroporationsmethode vor, bei der Glaskapillaren mit bekanntem Durchmesser verwendet werden, was die präzise Abgabe von exogener DNA in einige wenige Zellen in den Embryonen ermöglicht.

Methoden für die genau zu lokalisieren Übertragung von Zellen oder DNA in frühen Postimplantations Maus Embryonen

Dieses Protokoll stellt eine Methode quantitative, single-cell in situ Analyse der Proteinexpression durchzuführen lineage in mouse Spezifikation Präimplantationsembryonen zu studieren. Die Verfahren, die für die Sammlung von Blastozysten, Vollmontage Immunfluoreszenz-Nachweis von Proteinen, Imaging von Proben auf einem konfokalen Mikroskop und Kern Segmentierung und Bildanalyse beschrieben.

Quantitative Analyse der Proteinexpression zu studieren Lineage Spezifikation in Maus Präimplantationsembryonen

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein Verlust- zu beschreiben und zu gewinnen-Funktionsmethode, die zur Identifizierung Neogenin als stufenspezifischen Rezeptor anwendbar ist, die und die innere Zellmasse Differenzierung in preimplantation Maus-Embryonen zu Trophektoderm führt.

Verlust- und Gewinn-of-function-Ansatz Frühe Zellschicksal Bestimmungsfaktoren in Preimplantation Maus Embryonen zur Untersuchung

Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll für die Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) unter Verwendung einer reifen Maus-T-Zelllinie. Dieses Protokoll ist geeignet, um die Verteilung von spezifischen Histonmarken an bestimmten Promotorstellen oder genomweiten zu untersuchen.

Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) in Maus-T-Zell-Linien

Hier beschreiben wir eine Chromatin Immunopräzipitation (ChIP) und ChIP-Seq Bibliothek Vorbereitung Protokoll zum globalen epigenomischen Profile aus Low-Fülle Huhn embryonalen Proben zu generieren.

Chromatin Immunopräzipitation (ChIP) Protokoll für Low-Fülle embryonalen Proben

Hier beschreiben wir das Standardprotokoll für die Erkennung von β-Galaktosidase Aktivität in frühen ganze Maus-Embryonen und die Methode für die Paraffin-Schnitt und gegenfärbung. Dies ist ein einfaches und schnelles Verfahren, Genexpression während der Entwicklung zu überwachen, auch die Gewebeschnitte, angewendet werden können, Organe oder kultivierten Zellen.

Tracing Genexpression durch Nachweis der Aktivität der β-Galaktosidase in ganze Mausembryonen

Wir beschreiben eine Technik zur Profilierung von microRNAs in frühen Mausembryonen. Dieses Protokoll überwindet die Herausforderung des niedrigen Zelleingangs und der kleinen RNA-Anreicherung. Dieser Assay kann verwendet werden, um Veränderungen in der miRNA-Expression im Laufe der Zeit in verschiedenen Zelllinien des frühen Mausembryons zu analysieren.

Vorbereitung kleiner RNA-Bibliotheken für die Sequenzierung von frühen Mausembryonen

In dieser Arbeit wird eine Pipeline für hochwertige Einzelzell- und Zellkernsuspensionen von gastrulierenden Mausembryonen für die Sequenzierung von Einzelzellen und Zellkernen etabliert.

Einzelzell-RNA-Sequenzierung von mutierten ganzen Mausembryonen: Vom Epiblasten bis zum Ende der Gastrulation

Lernen Sie die Chromatin-Immunopräzipitation für die Analyse gewebespezifischer Gene in murinen Embryonen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Protein-DNA-Interaktionen während der embryonalen Entwicklung.

Chromatin Immunopräzipitation-Assay für Tissue-spezifische Gene mit Frühzeitige muriner Embryonen

Weitere Videos entdecken