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DOI: 10.3791/2678-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents an in vivo electroporation protocol for transfecting retinal ganglion cells (RGCs) in postnatal mice. This technique allows for precise genetic manipulation and labeling of RGCs, facilitating developmental studies.
Wir zeigen eine
Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, einzelne oder kleine Gruppen von retinalen Ganglienzellen mittels in vivo Elektroporation bei postnatalen Mäusen zu transfizieren, um die Entwicklung von retinalen ugalen Projektionen zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem der Augapfel chirurgisch freigelegt und ein kleines Volumen der Plasma-DNA-Lösung direkt in die Netzhaut injiziert wird. In einem zweiten Schritt werden Elektroden direkt über der Injektionsstelle auf dem Augapfel platziert und elektrische Impulse angelegt, die den Transfer von Plasma-DNA in retinale Neuronen ermöglichen.
Als nächstes werden im gewünschten Alter elektroporierte Netzhäute und Gehirne entnommen, um transfizierte retinale Ganglienzellen sichtbar zu machen, und ihre Projektionen auf die ZNS-Ergebnisse werden erhalten, die eine fluoreszierende Markierung sowohl von Dendriten als auch von axonalen ARBs von markierten retinalen Ganglienzellen in ihren verschiedenen subkortikalen Zielstrukturen zeigen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie der In-utero-Netzhautelektroporation, besteht darin, dass diese Technik weniger invasiv ist und frühe Axonführungsereignisse, wie z. B. das Überkreuzen am Chiasma opticum, nicht beeinträchtigt. Es ermöglicht uns auch, eine kleine Population oder einzelne retinale Ganglienzellen in postnatalen Mäusen mit präziser räumlicher und zeitlicher Kontrolle zu markieren.
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