Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion
30. August 2007
Micro-Dissektion Rattenhirn in verschiedenen Regionen ist äußerst wichtig für die Untersuchung von verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Dieses Video zeigt Mikrodissektion von vier großen Hirnregionen sind Riechkolben, frontalen Cortex, Striatum und Hippocampus in frischen Rattenhirngewebe. Nützliche Tipps für die schnelle Beseitigung von jeweiligen Regionen zu RNA-und Protein-Abbau des Gewebes zu vermeiden gegeben sind.
Hallo, ich bin Quint vom Fachbereich Anatomie der Universität Hongkong. Heute werde ich vorstellen, wie man das rote Gehirn in vier Hauptbereiche mikrodisseziert: A-Faktor-Foto-Cortex s. Stratum am Hippocampus. Hier sehen Sie eine schematische Darstellung, die zeigt, wie wir das Gehirn dissezieren.
Es gibt drei Schnitte. Die erste Schnittebene befindet sich am Übergang zwischen Bulbus olfactorius und dem frontalen Kortex. Die zweite Schnittebene verläuft am hinteren Ende des Corpus callosum.
Die dritte Schnittebene befindet sich an der vorderen Spitze der Phonik. Nach drei Schnitten gibt es vier Gehirnbahnen. Auf der linken Seite befindet sich ein Faktor.
Auf der rechten Seite befindet sich das Hippocampus. Der frontale Cortex liegt zwischen dem ersten und dem zweiten Schnitt. Die Codierungsnuklease, die Teil des Stratum ist, liegt zwischen dem zweiten und dritten Schnitt auf der frischen Gehirnhemisphäre.
Es ist sehr wichtig, zunächst den Corpus callosum und die Phonic zu erkennen. Anschließend können wir leicht die drei Schnittebenen lokalisieren. Die erste Schnittebene verläuft an der Verbindung einer Faktorbulbe und der frontalen Großhirnrinde.
Die zweite Schnittebene befindet sich in einem Bereich des Corpus callosum, und die dritte Schnittebene liegt an der vorderen Spitze der Phonik. Wir werden das Gehirn und das Mikroskop dissezieren. Die Dissektionswerkzeuge werden eiskalt aufbewahrt.
Nachdem wir diesen Eisblock mit DEPC-wasser gespült haben, legten wir ein Gehirn auf die eisgekühlte Metallplatte und teilten es in zwei hemisphärische Hälften, trennten den Bereich oberhalb des frontalen Cortex ab, sammelten ihn und lagerten ihn in flüssigem Stickstoff ein. Anschließend begannen wir mit der Gewinnung des frontalen Cortex. Schneiden Sie um die vordere Spitze des Balkens, schneiden Sie den präfrontalen Cortex ab, sammeln Sie ihn und lagern Sie ihn in flüssigem Stickstoff ein.
Anschließend präparieren wir das Strohobjekt. Führen Sie einen Schnitt in der Ebene des vorderen Teils, des phonischen Bereichs und der vorderen Kommissurfasern durch, trennen Sie den Hüllkern ab, sammeln Sie ihn ein und lagern Sie ihn in flüssigem Stickstoff. Abschließend präparieren wir das Hippocampus.
Zunächst müssen wir das Mittelhirn entfernen, um eine gute Sicht auf den Hippocampus zu erhalten. Den Hippocampus abtrennen und in flüssigem Stickstoff lagern. Verschiedene Hirnregionen sind mit unterschiedlichen neurodegenerativen Erkrankungen assoziiert. Beispielsweise steht das Striatum in Verbindung mit der Parkinson-Krankheit, während Frontalcortex und Hippocampus mit der Alzheimer-Krankheit assoziiert sind.
Die präzise mikrochirurgische Dissektion des Gehirns ermöglicht es uns, mRNA- und Proteinänderungen in der Region nachzuweisen.
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Übersicht
Dieses Video zeigt die Mikrodissektion von Rattengehirngewebe in vier Hauptregionen: Bulbus olfactorius, frontaler Kortex, Striatum und Hippocampus. Es enthält nützliche Tipps für die schnelle Entfernung dieser Regionen, um den Abbau von RNA und Proteinen zu verhindern.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Neurowissenschaften
- Neuroanatomie
- Neurodegenerative Erkrankungen
Hintergrund
- Die Mikrodissektion ist entscheidend für die Untersuchung von Hirnregionen.
- Das Verständnis verschiedener neurodegenerativer Erkrankungen erfordert präzise Gewebeproben.
- Die Erhaltung der RNA- und Proteintegrität ist für eine genaue Forschung unerlässlich.
- Frisches Rattenhirngewebe wird in dieser Studie für die Dissektion verwendet.
Zweck der Studie
- Effektive Techniken für die Dissektion von Gehirnregionen demonstrieren.
- Einblicke in die Gewebequalität während der Dissektion gewährleisten.
- Forschung zu neurodegenerativen Erkrankungen durch eine sachgemäße Probensammlung erleichtern.
Verwendete Methoden
- Mikrodissektion des Rattenhirns in definierte Regionen.
- Verwendung schematischer Abbildungen zur Anleitung des Dissektionsprozesses.
- Anwendung spezifischer Schnittebenen für die präzise Entfernung von Regionen.
- Tipps zur Minimierung der RNA- und Proteindegradation während der Dissektion.
Hauptergebnisse
- Erfolgreiche Dissektion des Riechkolbens, des frontalen Kortex, des Striatums und des Hippocampus.
- Demonstrierte Techniken zur Erhaltung der Gewebestruktur.
- Bereitstellung visueller Hilfsmittel zur Verbesserung des Verständnisses des Dissektionsprozesses.
- Hervorhebung der Bedeutung einer schnellen Entnahme, um eine Degradation zu vermeiden.
Schlussfolgerungen
- Die Mikrodissektion ist eine wertvolle Technik für die Neurowissenschaftsforschung.
- Angemessene Methoden können die Qualität von Gewebeproben erheblich verbessern.
- Diese Techniken können zur Erforschung neurodegenerativer Erkrankungen beitragen.
Häufig gestellte Fragen
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Die präzise mikrodissektorische Trennung von Rattenhirnregionen ermöglicht die hochwertige Isolierung von RNA und Protein für nachgeschaltete molekularbiologische Analysen in der Forschung zu neurodegenerativen Erkrankungen. Diese Fähigkeit ist entscheidend für die Validierung von Zielstrukturen und die mechanistische Absicherung in frühen Entdeckungsphasen, die auf regionsspezifische Krankheitsmechanismen abzielen. Zuverlässige regionale Probenentnahme unterstützt die translationale Kontinuität und die Entscheidungsfindung im Portfolio-Management bei der Wirkstoffforschung für das zentrale Nervensystem.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Ermöglicht die Isolierung von krankheitsrelevanten Hirnregionen für die molekulare Profilierung.
- Unterstützt die funktionelle Target-Validierung, indem regionsspezifische Veränderungen mit neurodegenerativen Pathologien verknüpft werden.
- Erleichtert die mechanistische Entschärfung von Risiken, indem präzises Hypothesentesten in definierten anatomischen Kontexten ermöglicht wird.
Screening und Assay-Entwicklung
- Liefert hochwertige Gewebeproben für die Entwicklung reproduzierbarer molekularer Assays.
- Gewährleistet die Integrität von RNA und Protein und unterstützt quantitative Auswertungen in nachgeschalteten Arbeitsabläufen.
- Standardisiert die Probenvorbereitung und verbessert die Vergleichbarkeit von Assays sowie die Zuverlässigkeit von Screenings.
Translationale und präklinische Forschung
- Ermöglicht die Abstimmung präklinischer Modelle auf menschliche Erkrankungen durch gezielte Untersuchung homologer Hirnregionen.
- Ermöglicht die Entdeckung und Validierung von Biomarkern in anatomisch relevanten Geweben.
- Unterstützt eine risikoadjustierte Weiterentwicklung, indem robuste molekulare Daten aus definierten Regionen bereitgestellt werden.
Pipeline- und Workflow-Integration
Dieses Mikrodissektionsprotokoll integriert sich an der Schnittstelle zwischen früher Entdeckung und präklinischer Forschung und ermöglicht regionenspezifische molekulare Analysen, die die Zielstrukturauswahl und die Priorisierung von Wirkstoffleitstrukturen unterstützen.
- Entdeckungsbiochemie: Ermöglicht die hypothesengeleitete Untersuchung neurodegenerativer Mechanismen in definierten Hirnregionen.
- Screening: Bereitstellung standardisierter, hochwertiger Proben für die Assay-Entwicklung und die Evaluierung von Substanzen.
- Analytik: Unterstützt die quantitative Messung von RNA- und Proteinänderungen über verschiedene Hirnregionen hinweg.
- Translationale Forschung: Verbindet präklinische Erkenntnisse mit klinischer Relevanz, indem sie auf krankheitsrelevante Regionen fokussiert.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Etabliert einen reproduzierbaren Workflow zur Gewebeprophylaxe, der in verschiedenen Forschungsprogrammen des zentralen Nervensystems Anwendung finden kann.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Erhöht die Vorhersagesicherheit bei regionspezifischen molekularen Befunden.
- Operativer Wert: Verbessert die Reproduzierbarkeit und Standardisierung der Gewebeverarbeitung.
- Strategischer Wert: Verbessert Go/No-Go-Entscheidungen, indem biologische Unschärfen in CNS-Pipelines reduziert werden.
- Portfolio-Wirkung: Ermöglicht eine risikoadjustierte Priorisierung von Zielstrukturen bei neurodegenerativen Erkrankungen.
Durchführungsaspekte
- Erfordert anatomisches Fachwissen für die genaue Identifizierung und Dissektion von Regionen.
- Erfordert eine Kühlkette und schnelle Verarbeitung, um die Integrität von RNA und Proteinen zu bewahren.
- Benötigt standardisierte Protokolle für die Reproduzierbarkeit zwischen verschiedenen Arbeitsgruppen.
- Kann Anpassungen für verschiedene Nagetiermodelle oder Hirnregionen erfordern.
- Setzt den Zugang zu spezialisierten Dissektionswerkzeugen und Infrastruktur für die Kryokonservierung voraus.
