Name: Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Lernen Sie die Mikrodissektion von Rattenhirnregionen für RNA- und Proteinextraktion. Diese Methode zeigt präzise Techniken zur schnellen Entnahme von Bulbus olfactorius, frontalem Kortex, Striatum und Hippocampus.

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Schritt 1 Sacrifice der Ratte nach festgelegten Protokollen. Entfernen Sie das Gehirn aus dem Schädel und spülen Sie ihn in eiskaltes DEPC behandelt Milli Q-Wasser auf jeder Oberfläche Blut zu entfernen. Schritt 2 Legen Sie an kalten Metallplatte. Cut das Gehirn bi-Hälfte in rechter und linker Gehirnhälfte. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="269_Figure-01" width="474" height="224" /> Abbildung 1. Das Schneiden Positionen aus dem medialen Blick Ratte Hemisphäre Schritt 3 Sammeln Sie die Riechkolben gleich nach dem ersten Schnitt. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269_Figure-02" width="564" height="145" /> Abbildung 2. Riechkolben Dissektion Schritt 4 Sammeln Sie die frontalen Kortex direkt nach dem zweiten Schnitt mit einem Messer und einem Dumont Nr. 5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269_Figure-03" width="566" height="220" /> Abbildung 3. Frontalen Kortex Dissektion Schritt 5 Sammeln Sie das Striatum (Nucleus caudatus) direkt nach dem dritten Schnitt mit Hilfe von zwei Dumont No.5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269_Figure-04" width="555" height="208" /> Abbildung 4. Striatum (Nucleus caudatus) Dissektion Schritt 6 Zum Sammeln der Hippocampus, legte der ventralen Seite des Gehirns auf und entfernen Sie dann Mittelhirn zum Hippocampus aussetzen. Präparieren Sie die Hippocampus aus der Hirnrinde mit zwei Dumont No.5 Pinzette. Flash-Freeze der Probe in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269_Figure-05" width="559" height="191" /> Abbildung 5. Hippocampus Dissektion

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

Die Tiere wurden nach dem Protokoll für die Verwendung von tierischem in Forschung Ausschuss für die Verwendung lebender Tiere in Lehre und Forschung (CULATR) in der Universität von Hong Kong zugelassen und nach den National Institutes of Health Richtlinien für die Nutzung von Tieren behandelt.

Verschiedenen Hirnregionen assoziieren mit verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Zum Beispiel beziehen frontalen Kortex und Striatum mit Parkinson-Krankheit, während Hippocampus bezieht sich mit der Alzheimer-Krankheit. Präzise Mikro-Dissektion des Gehirns ermöglicht es uns, die mRNA-und Protein-Veränderungen in erkrankten Region genauer zu erfassen.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Präparationswerkzeuge</td><td></td><td></td><td>Metallplatte, Pinzette, Klinge usw. Jedes Gerät einzeln in Aluminiumfolie verpackt und acht Stunden lang bei 180 °C erhitzt, um RNasen zu entfernen. Vor der Verwendung eiskalt stellen.</td></tr></tbody></table>

micro-dissektion rattenhirns rna oder protein extraction von bestimmten hirnregion

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-Dissektion Rattenhirn in verschiedenen Regionen ist äußerst wichtig für die Untersuchung von verschiedenen neurodegenerativen Erkrankungen. Dieses Video zeigt Mikrodissektion von vier großen Hirnregionen sind Riechkolben, frontalen Cortex, Striatum und Hippocampus in frischen Rattenhirngewebe. Nützliche Tipps für die schnelle Beseitigung von jeweiligen Regionen zu RNA-und Protein-Abbau des Gewebes zu vermeiden gegeben sind.

Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion

Die Mikrodissektion des Rattengehirns in verschiedene Regionen ist von entscheidender Bedeutung für die Untersuchung verschiedener neurodegenerativer Erkrankungen. Dieses Video demonstriert ...

Hallo, ich bin Quint vom Fachbereich Anatomie der Universität Hongkong. Heute werde ich vorstellen, wie man das rote Gehirn in vier Hauptbereiche mikrodisseziert: A-Faktor-Foto-Cortex s. Stratum am Hippocampus. Hier sehen Sie eine schematische Darstellung, die zeigt, wie wir das Gehirn dissezieren.Es gibt drei Schnitte. Die erste Schnittebene befindet sich am Übergang zwischen Bulbus olfactorius und dem frontalen Kortex. Die zweite Schnittebene verläuft am hinteren Ende des Corpus callosum.Die dritte Schnittebene befindet sich an der vorderen Spitze der Phonik. Nach drei Schnitten gibt es vier Gehirnbahnen. Auf der linken Seite befindet sich ein Faktor.Auf der rechten Seite befindet sich das Hippocampus. Der frontale Cortex liegt zwischen dem ersten und dem zweiten Schnitt. Die Codierungsnuklease, die Teil des Stratum ist, liegt zwischen dem zweiten und dritten Schnitt auf der frischen Gehirnhemisphäre.Es ist sehr wichtig, zunächst den Corpus callosum und die Phonic zu erkennen. Anschließend können wir leicht die drei Schnittebenen lokalisieren. Die erste Schnittebene verläuft an der Verbindung einer Faktorbulbe und der frontalen Großhirnrinde.Die zweite Schnittebene befindet sich in einem Bereich des Corpus callosum, und die dritte Schnittebene liegt an der vorderen Spitze der Phonik. Wir werden das Gehirn und das Mikroskop dissezieren. Die Dissektionswerkzeuge werden eiskalt aufbewahrt.Nachdem wir diesen Eisblock mit DEPC-wasser gespült haben, legten wir ein Gehirn auf die eisgekühlte Metallplatte und teilten es in zwei hemisphärische Hälften, trennten den Bereich oberhalb des frontalen Cortex ab, sammelten ihn und lagerten ihn in flüssigem Stickstoff ein. Anschließend begannen wir mit der Gewinnung des frontalen Cortex. Schneiden Sie um die vordere Spitze des Balkens, schneiden Sie den präfrontalen Cortex ab, sammeln Sie ihn und lagern Sie ihn in flüssigem Stickstoff ein.Anschließend präparieren wir das Strohobjekt. Führen Sie einen Schnitt in der Ebene des vorderen Teils, des phonischen Bereichs und der vorderen Kommissurfasern durch, trennen Sie den Hüllkern ab, sammeln Sie ihn ein und lagern Sie ihn in flüssigem Stickstoff. Abschließend präparieren wir das Hippocampus. Zunächst müssen wir das Mittelhirn entfernen, um eine gute Sicht auf den Hippocampus zu erhalten. Den Hippocampus abtrennen und in flüssigem Stickstoff lagern. Verschiedene Hirnregionen sind mit unterschiedlichen neurodegenerativen Erkrankungen assoziiert. Beispielsweise steht das Striatum in Verbindung mit der Parkinson-Krankheit, während Frontalcortex und Hippocampus mit der Alzheimer-Krankheit assoziiert sind.Die präzise mikrochirurgische Dissektion des Gehirns ermöglicht es uns, mRNA- und Proteinänderungen in der Region nachzuweisen.

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Research

Forschung

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Biology

Biologie

Die Profilierung der RNA-Expression in diskreten Regionen des Mausgehirns erfordert eine präzise und reproduzierbare Strategie zur Gewinnung von Gewebeproben. Hier wird ein Protokoll beschrieben, das sowohl die koronare Schnittführung des Gehirns als auch die mikrodissektionsbasierte Gewebeentnahme mithilfe eines Gewebecorers nutzt. Die Ausbeute und Qualität der gesamten RNA aus den resultierenden Proben bestätigt die Eignung der dargestellten Methode.

Non-Laser Capture Microscopy Ansatz für die Mikrodissektion von Discrete-Maus Hirnregionen für Gesamt-RNA Isolierung und Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling

Wir beschreiben ein Rattenmodell der Posttraumatischen Belastungsstörung (PTSD), die die anhaltenden Veränderungen im neuroendokrinen Funktion und die verzögerte langfristige, übertriebene Angstreaktion, die charakteristisch für PTBS-Patienten zeigt. Das Tiermodell und hier beschriebenen Methoden sind nützlich zum Korrelieren Biomarkern in Gehirnkernen, die mechanistische sind, aber nicht bei Patienten gemessen werden, wobei Biomarkern in peripheren weißen Blutzellen, welches kann.

Biomarker in einem Tiermodell für die Aufdeckung Neural, hämatologischen und Behavioral Korrelate der PTSD

Dieses Video zeigt den Prozess der Isolierung von Gehirn-Mikrogefäßen von euthanasierten Ratten. Es umfasst die Dissektion des Gehirns, die Reinigung des Gewebes und die mechanische Verdauung, gefolgt von einer wiederholten Zentrifugation, um die reine Fraktion der Mikrogefäße zu isolieren.

Eine Methode zur Isolierung neurovaskulärer Einheiten aus dem Gehirn von Ratten

Dieses Video zeigt den Nachweis der Serotoninrezeptor-RNA-Synthese mit Hilfe von Oligonukleotidsonden in Rattenhirngewebe, das vom Serotonin-Syndrom betroffen ist. Das Protokoll umfasst eine Gewebevorbehandlung, Sondenhybridisierung und enzymatische Detektion, um die RNA-Expression von Serotoninrezeptoren unter einem Mikroskop sichtbar zu machen und zu quantifizieren.

In-situ-Hybridisierung mit Oligonukleotidsonden zur Untersuchung der RNA-Expression in Hirnschnitten von Ratten

Wir beschreiben, wie der Laser-Mikrodissektion (LCM) verwenden, um angereichert Populationen von Neuronen im Hippocampus oder einzelne Neuronen aus Gefrierschnitten der Verletzten Rattenhirn für nachfolgende Genexpressionsanalyse mittels quantitativer real-time PCR und / oder des gesamten Genoms Microarrays erhalten.

Laser Capture Mikrodissektion von Angereichert Populationen von Neuronen oder Single Neurons zur Genexpressionsanalyse Nach Traumatic Brain Injury

Genexpressionsanalyse einer Untergruppe von Zellen in einem spezifischen Gewebe stellt eine große Herausforderung. Dieser Artikel beschreibt, wie man qualitativ hochwertige Gesamt-RNA aus einer bestimmten Zellpopulation durch die Kombination einer schnellen Immunomarkierung Verfahren mit Laser Mikrodissektion zu isolieren.

RNA-Isolierung aus zellspezifische Subpopulationen Mit Laser-Mikrodissektion In Verbindung mit Rapid-Immunmarkierung

Hier wird eine Methode zur Isolierung der Ratte Gehirn mikrogefäßen und für die Vorbereitung der Membran Proben beschrieben. Dieses Protokoll hat den klaren Vorteil zur Herstellung von angereichertem kapilläre Proben mit akzeptablen Protein von einzelnen Tieren ergeben. Proben können dann für robuste Protein Analysen auf das Gehirn mikrovaskulären Endothel verwendet werden.

Eine einfache und reproduzierbare Methode, Membran-Proben von frisch isolierte Ratte Gehirn Mikrogefäßen vorzubereiten

Wir bieten ein Protokoll zur Isolierung von Mikroglia aus verschiedenen sezierten Regionen einer erwachsenen Maushirnhälfte, gefolgt von halbautomatischer Bibliotheksvorbereitung für die tiefe einzelzellige RNA-Sequenzierung von Transkriptomen in voller Länge. Diese Methode wird dazu beitragen, die funktionelle Heterogenität von Mikroglia bei Gesundheit und Krankheit aufzuklären.

Isolierung von regionsspezifischer Mikroglia von einer Erwachsenenmaus Gehirnhälfte für tiefe einzellige RNA-Sequenzierung

Dieses Verfahren beschreibt die Sammlung diskreter gefrorener Hirnregionen, um hochwertiges Protein und RNA mit kostengünstigen und allgemein verfügbaren Werkzeugen zu erhalten.

Sammlung von gefrorenen Nagetier-Hirnregionen für Downstream-Analysen

Wir präsentieren ein praktisches, schrittweises, schnelles Protokoll für die Entfernung und Dissektion diskreter Regionen aus frischem Hirngewebe von Mäusen. Die Gewinnung von Hirnregionen für molekulare Analysen ist in vielen neurowissenschaftlichen Laboren zur Routine geworden. Diese Gehirnregionen werden sofort eingefroren, um qualitativ hochwertige transkriptomische Daten für die Analyse auf Systemebene zu erhalten.

Mikrodissektion des Mausgehirns in funktionell und anatomisch unterschiedliche Regionen

Die Kombination von Laser-Capture-Mikrodissektion und mikrofluidischer RT-qPCR bietet anatomische und biotechnische Spezifität bei der Messung des Transkriptoms in einzelnen Neuronen und Glia. Die Anwendung kreativer Methoden mit dem systembiologischen Ansatz auf psychiatrische Erkrankungen kann zu Durchbrüchen im Verständnis und in der Behandlung führen, wie z.B. die Neuroinflammation-Anti-Belohnungs-Hypothese bei Sucht.

Untersuchung von Treibern von Anti-Belohnung im Suchtverhalten mit anatomisch spezifischen Einzelzell-Genexpressionsmethoden

Lernen Sie die Mikrodissektion von Rattenhirnregionen für RNA- und Proteinextraktion. Diese Methode zeigt präzise Techniken zur schnellen Entnahme von Bulbus olfactorius, frontalem Kortex, Striatum und Hippocampus.

Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion

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