Name: Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Lernen Sie das Maus-Komplett-Stasis-Modell der Vena-cava-inferior-Thrombose zur Untersuchung von Thrombusbildung und Entzündungsprogression. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung von Thrombus und Venenwandgewebe.

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1. Maus Anästhesieverfahren <ol><li> Die Tiere sind aus ihrem Käfig genommen und in ein Betäubungsmittel präoperativen Induktion Kammer für Gas-Induktion bei 5% Isofluran und 100% Sauerstoff, bei einer Flussrate von 0,5 Liter pro Minute (Verdampfer gesteuert). </li><li> Mäuse sind in der Narkoseeinleitung Kammer sediert, entfernt von Kammer-und der ventralen Bauch ist mit elektrischen Haarschneider rasiert, gepflegt oder in der Kammer, wenn ein Haar Enthaarungsmittel verwendet wird (1min). </li><li> Noch unter Sedierung, sie wogen, werden die Augen mit einer sterilen Augensalbe geschmiert und dann in einen dorsalen recumbancy an einem warmen Wasser zirkuliert Heizgerät unter Vollnarkose, mit einer Nase Kegel, mit Isofluran und Sauerstoff. An diesem Punkt der Sauerstoffmenge auf 0,2 Liter pro Minute reduziert. </li><li> Der Bauch ist mit Chlorhexidin-Lösung besprüht (Chlorhexidindiacetat schnell bacterialcidal und persistent) und wischte sich mit steriler Gaze dreimal oder bis zum OP-Gebiet ist sauber. </li></ol> 2. Maus Micro-chirurgischen und Recovery-Verfahren <ol><li> Ein ventralen Mittellinie Schnitt (2cm) ist mit Iris Schere durch die Haut und Bauchwand Freilegung der Bauch gemacht. Ein steriler Kochsalzlösung getränkt 2x2in Gaze wird verwendet, um den Darm des Tieres linken Seite widerspiegeln. Eine Maus restrainer ist in Ort ermöglicht die Visualisierung der unteren Hohlvene (IVC) setzen. </li><li> An dieser Stelle ist ein Wartungs-Niveau von 2% isoflurance und 100% Sauerstoff von 0,2 l / min für den Rest des chirurgischen Eingriffs eingesetzt. </li><li> Stumpfe Präparation wird erleichtert, mit einem sterilen Tupfer Applikator und extra zarte Iris halbgebogen Gewebe Zange. Es muss im Umgang mit Maus Gewebe für sie äußerst fragil eingenommen werden. Beim Betreten der Bauchhöhle, eine sterile Kochsalzlösung getränkt 4x4in Gaze zu reflektieren und exteriorisieren den Darm auf einem sterilen Tuch, so dass die Visualisierung der IVC. </li><li> Alle IVC zurück Branchen, von der Nierenvenen der iliakalen Bifurkation sind verödet, während Seitenäste mit 7-0 nicht-reaktiven Prolene Fäden werden ligiert. </li><li> Die IVC ist von der Aorta getrennt, unmittelbar unterhalb des Nierenvenen. 7-0 Prolene wird verwendet, um die IVC ligieren. </li><li> Die Laparotomie Website wird in einem Zwei-Schicht verschlossen. Unser Labor verwendet 5-0 Vicryl, ein synthetisches Nahtmaterial, in einem kontinuierlichen Muster, um die Bauchdecke zu schließen. Adhesive Hautleim wird verwendet, um die Haut zu schließen. Es gibt keine externen Nähte für die Herausnahme. </li><li> Mäuse werden dann in einer individuellen Maus Käfig wieder beobachtet, post-operativ (45 Minuten bis 2 Stunden) unter einer Wärmelampe (Mindestabstand-24 cm entfernt von Käfig), dann wieder an ihren ursprünglichen Wohneinheiten. Schmerzmittel und entzündungshemmende Mittel können verwendet werden, wenn sie nicht mit Studienziel nicht stören. Wissenschaftliche Begründung für Schmerzmittel vorenthalten, Veterinär-und ICUCA Genehmigung erforderlich sind. Unser Labor hat festgestellt, dass Buprenorphin, 0.05-0.1 mg / kg SQ ein ausgezeichnetes pre-und post-operative Analgetikum für Mäuse ist. Darüber hinaus kann Lidocain bei 4mg/kg (0,4 ml / kg einer 1% igen Lösung) in die Inzisionsstelle infundiert werden, wenn systemische Analgetika können experimentelle Ergebnisse zu verwechseln. </li><li> Sham Tiere von jeder experimentellen Gruppe durchlaufen die oben dissection für den chirurgischen Ansatz verwendet, mit Ausnahme der IVC oder Ablassen Zweige nicht ligiert oder koaguliert. </li><li> Euthanasie ist in Übereinstimmung mit den Empfehlungen der American Veterinary Medical Association Richtlinien zur Euthanasie für Nager gesetzt durchgeführt. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

Die Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose kann auf mehrere Stämme von Mäusen unterschiedlichen Alters durchgeführt werden. Das Modell ist am besten für Mäuse von mindestens 20 Gramm Gewicht geeignet. Dieses Tiermodell von venösen Thrombosen können Ermittler zu entzündlichen Wechselwirkungen zwischen der Venenwand und die Verschlusskrankheit Venenthrombose zu studieren. Aus unserer Erfahrung haben wir festgestellt, dass 10 oder mehr Tieren pro Gruppe erforderlich sind, um statistische Signifikanz zw...

<table border="1"><tbody><tr><td> Büromaterial und-ausstattung </td></tr><tr><td> Isofluran-Gas </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 Naht </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 Naht </td></tr><tr><td> Hautleim </td></tr><tr><td> Eye lube </td></tr><tr><td> Nolvasan Lösung oder bakteriostatischen Lösung </td></tr><tr><td> Stereomikroskop Umfang </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Cotton Applikatoren </td></tr><tr><td> 2x2 Gauze </td></tr><tr><td> Heizkissen </td></tr><tr><td> Narkosegerät </td></tr><tr><td> Glasperle Instrument Sterilisator </td></tr><tr><td> Micro chirurgische Instrumente </td></tr><tr><td> Abdominal der Bewegungsfreiheit </td></tr></tbody></table>

maus komplette stasis model of inferior vena cava thrombose

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Die venöse Thromboembolie (VTE) beinhaltet sowohl tiefe Venenthrombose (DVT) und Lungenembolie (PE). In den Vereinigten Staaten von Amerika (USA), die hohe Morbidität und Mortalität machen VTE ein ernstes Gesundheitsproblem 1-2. Nach Herzerkrankungen und Schlaganfall, ist VTE die dritthäufigste Gefäßerkrankungen 3. Allein in den USA gibt es schätzungsweise 900.000 Menschen erkranken jährlich mit 300.000 Todesfälle jährlich 3. Eine zuverlässige in vivo-Tiermodell, um die Mechanismen dieser Krankheit Studie notwendig ist. Die Vorteile der Verwendung der Maus komplett Stase Modell der unteren Hohlvene Thrombose sind mehrere. Das Maus-Modell erlaubt die Verwaltung von sehr kleinen Volumina der begrenzten Verfügbarkeit Testmittel, Kosten zu reduzieren drastisch. Vielversprechendsten ist das Potenzial für Mäuse mit Gen-Knockouts, dass bestimmte Entzündungs-und Gerinnungsfaktor Funktionen abgegrenzt werden können. Aktuelle molekularbiologische Tests erlauben die Quantifizierung der Venenwand, Thrombus, Vollblut und Plasma-Assays. Allerdings ist ein wichtiges Anliegen mit diesem Modell die operative Größe Zwänge und die Brüchigkeit der Gefäße. Auch aufgrund der geringen IVC Einwaage (Mittelwert 0,005 Gramm) ist es notwendig, Tierzahlen zur genauen statistischen Analyse für Gewebe, Thrombose und Blut-Tests wie real-time Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR), Western-Blot zu erhöhen, Enzyme Linked Immuno (ELISA), Zymographie, Venenwand und Thrombus zelluläre Analyse und Vollblut-und Plasma-Assays 4-8. Der größte Nachteil bei der Stasis-Modell ist, dass die mangelnde Durchblutung der maximalen Wirkung der verabreichten systemischen Therapeutika auf der Thrombus und Venenwand hemmt.

Die Maus komplette Stase Modell der unteren Hohlvene Thrombose liefert quantifizierbare Mengen Venenwand Gewebe und Thrombus. Es hat sich bewährt für die Bewertung Wechselwirkungen zwischen der Venenwand und der okklusiven Thrombus und bei der Beurteilung der Progression von akuten zu chronischen Entzündungen sinnvoll.

Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose

Die venöse Thromboembolie (VTE) umfasst sowohl die tiefe Venenthrombose (TVT) als auch die Lungenembolie (LE). In den Vereinigten Staaten (U.S.) führen die hohe Morbidität und ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die V. cava inferior (IVC) zu ligieren, wodurch ein vollständiger Stau entsteht, der zu einem Thrombus führt, um die Thrombogenese und deren Auflösung zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem zunächst die IVC über einen ventralen medianen Schnitt freigelegt wird. Anschließend werden alle seitlich und dorsal abfließenden Seitenäste lokalisiert und entweder koaguliert oder ligiert. Dann wird die V. cava inferior unterhalb der Nierenvenen von der Aorta separiert und ligiert. Schließlich werden die V. cava inferior und der Thrombus zu verschiedenen Zeitpunkten zur molekularen Untersuchung entnommen. Letztendlich können Ergebnisse erhalten werden, die das Ausmaß der Thrombuslast bis zum sechsten Tag zeigten.Das Mausmodell der Ligatur der Vena cava inferior wurde in unserem Labor entwickelt, um Mäuse mit gelöschten Genen zu untersuchen. Die visuelle Darstellung dieses chirurgischen Modells ist entscheidend, da die einzelnen Operationsschritte aufgrund der erforderlichen mikrochirurgischen Techniken schwer zu erlernen sind. Beginnen Sie damit, das Tier in einer narkotischen präoperativen Induktionskammer mit 5% Isofluran und 100% Sauerstoff mit einer Flussrate von 0,5 Litern pro Minute zu anästhesieren.Entfernen Sie das Tier aus der Kammer, halten Sie es auf dem Rücken und rasieren Sie den ventralen Bauchbereich mit einer elektrischen Schermaschine. Wiegen Sie anschließend das Tier. Danach befeuchten Sie die Augen mit einer sterilen Augensalbe.Legen Sie das Tier unter Allgemeinnarkose mit Isofluran und Sauerstoff auf den Rücken auf eine Wärmflasche mit warmem Wasser. Sprühen Sie die Bauchregion mit einer Chlorhexidinlösung ein und wischen Sie sie mit steriler Gaze ab. Desinfizieren Sie den Bauchbereich, bis der Operationsbereich sauber ist, um die Operation zu beginnen.Unter Verwendung von Iris-Scheren einen medianen ventralen Schnitt durch die Haut und die Bauchwand führen und den Bauchraum mit steriler, in Kochsalzlösung getränkter Gaze freilegen. Die Därme des Tieres nach links verlagern. Einen Maushalter verwenden, um die untere Vena cava oder VCI freizulegen.Ab diesem Schritt und für den weiteren Verlauf der Operation die Anästhesie mit 2 % Isofluran und 100 % Sauerstoff mit einer Geschwindigkeit von 0,2 Litern pro Minute aufrechterhalten. Mithilfe eines sterilen Wattestäbchens und besonders feiner Iris-Gewebeklemmen eine stumpfe Präparation der Bauchfascia durchführen, um die Vena cava inferior (IVC) und alle ihre Seitenäste freizulegen.Veröten Sie zunächst alle Seitenäste der V. cava inferior von den Nierenvenen bis zur Iliacabifurkation. Danach ligieren Sie die Seitenäste mit sieben nicht reaktiven Prolin-Nähten. Lösen Sie die V. cava inferior direkt kaudal der Nierenvenen von der Aorta ab. Verwenden Sie sieben-oh-Prolin-Nähte, um die V. cava inferior zu ligieren. Schließen Sie die Bauchwand mit fünf-oh-Vicryl-Synthetiknähten. Anschließend verschließen Sie die Haut mit einem adhäsiven Hautkleber.Beobachten Sie das Tier in einem Erholungskäfig unter einer Wärmelampe und bringen Sie es anschließend in seine ursprüngliche Haltungseinheit zurück. Diese Analyse vergleicht Kontrollmäuse mit Tieren, bei denen eine IVC-Ligatur und Thrombose zum Zeitpunkt der Euthanasie durchgeführt wurden. Am zweiten oder sechsten Tag wurden der IVC-Thrombus und die zugehörige Venenwand entfernt und gewogen.Die Messung des Thrombusgewichts ermöglicht es dem Untersucher, das Ausmaß der Thrombose und dessen zeitlichen Rückbildungsgang zu dokumentieren. Sie ist ein Indikator für das mit der Endothelzellenaktivierung assoziierte entzündliche Ereignis. Die Messung liefert zudem einen nützlichen Hinweis darauf, wie wirksam ein therapeutisches Mittel bei der Verringerung der Entzündung und der Menge des Venenwand-Thrombus ist. Hier wurde die V. cava inferior zusammen mit der Aorta entfernt.Paraffin-eingebettete Schnitte auf Objektträgern, gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin. Dieses Diagramm zeigt die Anzahl der polymorphen nukleären Zellen oder PMNs in Gewebeproben von Kontroll- im Vergleich zu Versuchsmäusen. Die Quantifizierung entzündlicher Zellpopulationen in der Venenwand dient der Dokumentation der natürlichen akuten bis chronischen Entzündungsreaktion in der Venenwand bei Vorliegen von venösen Thromben in einem gesunden Tier; am zweiten Tag einer akuten Entzündungsreaktion sollten überwiegend Neutrophile nachweisbar sein.Wie in dieser Abbildung dargestellt, sollte die Neutrophilenpopulation in der Venenwand ab dem zweiten Tag abnehmen, wenn keine Infektion vorliegt. In unserem Mausmodell der venösen Thrombose wird hier die Anzahl der Monozyten in der Venenwand verglichen.Eine stärkere subakute und chronische entzündliche Reaktion der Venenwand wird zunehmen. In Populationen von Monozyten in der Venenwand sezernieren Monozyten proteolytische Enzyme, von denen gezeigt wurde, dass sie die natürliche Auflösung des venösen Thrombus fördern. Langfristig, sofern keine Infektion vorliegt, sollte man aus diesem Video nun ein gutes Verständnis dafür haben, wie man unser IVC-Ligaturmodell durchführt.Dieses Modell eignet sich hervorragend zur Untersuchung der Thrombogenese und der Auflösung des Thrombus im Zeitverlauf.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die elektrolytische Induktion der endothelialen Aktivierung der inneren Oberfläche der Inferior Vena Cava Ergebnisse im venösen Typ Thrombusbildung durch eine endotheliale Aktivierung und teilweisen Blut-Stase, zwei Komponenten der Virchow-Trias.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Replikation eines thrombotischen Schlaganfalls in einem Mausmodell, indem die rechte Arteria carotis communis blockiert und die Maus einer sauerstoffarmen Umgebung ausgesetzt wird. Dieser Prozess reduziert den Blut- und Sauerstofffluss zum Gehirn, was zur Bildung von Blutgerinnseln und Hirnschäden führt.

Induktion eines thrombotischen Schlaganfalls durch Hypoxie und Ischämie im Mausmodell

Wir beschreiben hier Stenose in der minderwertigen Vena Cava als ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose. Dieses Modell rekapituliert Blut fließen Einschränkung, einer der wichtigsten Auslöser von venösen Thrombosen in den Menschen.

Stenose der minderwertigen Vena Cava: ein Mausmodell der tiefen Venenthrombose

Dieses Protokoll beschreibt die Schritte zum Venenthrombose mit einem Stasis-Modell zu erhalten. Darüber hinaus verwenden wir eine nicht-invasive Methode um thrombusbildung und Auflösung im Laufe der Zeit zu messen.

Tiefe Venenthrombose, induziert durch Stauung in den Mäusen durch Hochfrequenz-Sonographie überwacht

Eine aortocavale Fistel wurde durch Daspunktieren der murinen Infra-Nieren-Aorta durch beide Wände in die untere Vena cava geschaffen und es folgte die Schaffung einer Stenose in ihrem Abfluss durch partielle Ligation der unteren Vena cava. Dieses reproduzierbare Modell kann verwendet werden, um zentrale venöse Stenose zu studieren.

Murine Modell der zentralen venösen Stenose mit Aortocaval Fistel mit einem Abfluss Stenose

Hier stellen wir ein neuartiges Sprague-Dawley (SD) Rattenmodell der überlegenen sagittalen Sinus-Thrombose (SSS) mittels einer Thread-Embolisierungsmethode her, und die Stabilität und Zuverlässigkeit des Modells wurden überprüft.<br...

Etablierung eines Rattenmodells der oberen Sagittal-Sinus-Okklusion über eine Thread-Embolism-Methode

Dieser Artikel zielt darauf ab, eine optimierte Methode zur Beurteilung von Venenthrombosen in einem Mauskrebsmodell vorzustellen, bei der Gefäßclips verwendet werden, um eine venöse Ligatur zu erreichen. Die Optimierung minimiert die Variabilität bei thrombosebedingten Messungen und erhöht die Relevanz für krebsassoziierte Venenthrombosen beim Menschen.

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

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Nagetier untere Vena Cava Venoplastik Ballonmodell

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Die Implantation von Vena Cava Interposition Graft in Maus-Modell

Krebs ist eine komplexe Erkrankung, die durch den den Tumor umgebenden Gewebes sowie lokale pro- und anti-inflammatorischen Mediatoren beeinflusst wird. Daher kann orthotrope Pritzer, anstatt subkutanen Modellen nützlich sein, um Krebsprogression in einer Weise, dass eine bessere ahmt menschlichen Pathologie studieren.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Lernen Sie das Maus-Komplett-Stasis-Modell der Vena-cava-inferior-Thrombose zur Untersuchung von Thrombusbildung und Entzündungsprogression. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung von Thrombus und Venenwandgewebe.

Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose

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