Blinddarm Ligation Punktion

Hallo, mein Name ist Miguel Toscano aus dem Labor von Dr. Dena in der Abteilung für Mikrobiologie und Hämatologie an der Temple University. Heute zeigen wir Ihnen, wie man das iCal-Beschuldigungs- und Punktionsmodell in der C57 Black-Six-Mausstamm aufbaut. Wir verwenden dieses Modell in unserem Labor, um eine menschliche Sepsis nachzuahmen.

Grundsätzlich besteht dieses Modell aus einer Punktion des Colon, die die Freisetzung von fäkalen Bestandteilen in die Bauchhöhle ermöglicht, um eine polymikrobielle Sepsis hervorzurufen und so eine übermäßige Immunantwort auszulösen. Bei diesem Modell werden zahlreiche Organe und verschiedene Zelltypen irreversibel geschädigt, was letztendlich zum Tod des Versuchstieres führen kann.

Beginnen wir also. Anästhesie der Maus. Der erste Schritt besteht darin, das Tier durch eine intraperitoneale Injektion zu anästhesieren.

Eine Mischung im Verhältnis eins zu eins aus Ketomine und Xylazin. Um zu verhindern, dass die Maus uns beißt, und um sie nicht zu verletzen, müssen wir die Maus mit einer Hand am Schwanz packen. Mit der anderen Hand drücken wir ihren Rücken gegen den Boden.

Dann können wir die Maus am Hinterkopf packen und das Tier auf den Rücken drehen, um den Bauch freizulegen. Mit einer 29-Gauge-Insulinspritze injizieren wir 20 bis 30 Mikroliter des Anästhetikums in die Bauchhöhle. Um die Maus auf den Eingriff vorzubereiten, greifen Sie in den Nacken der Maus und rasieren Sie den Bauch, indem Sie den Schwanz und/oder das Bein der Maus festhalten.

Wir überprüfen, ob die Maus schmerzunempfindlich ist. Anschließend wird der Bauchraum desinfiziert, und zwar zunächst durch Abreiben mit Betadine-Lösung, gefolgt von Abwischen mit einem Isopropanol-Tupfer für mindestens eine Minute. Um die Laparotomie zu üben, heben wir mit der Pinzette die Haut in der Mitte des Bauches an und führen einen kleinen Schnitt von etwa einem Zentimeter Länge durch.

Heben Sie dann das Perineum an und führen Sie einen weiteren kleinen Schnitt durch, um die Bauchhöhle freizulegen. Halten Sie mit einer gebogenen Pinzette die Bauchfellmembran. Identifizieren und exponieren Sie den Blinddarm, indem Sie ihn durch die Bauchfellmembran führen.

Platzieren Sie es über dem Abdomen. Jetzt ist der Moment der Ligatur gekommen. Dies ist ein wichtiger Faktor.

Um die Schweregrad des Modells zu bestimmen, kann die Intensität des Eingriffs moduliert werden. Durch eine ausgedehnte Ligatur entwickeln die Mäuse eine mildere Sepsis. Wird die Ligatur näher am Ende des Blinddarms angelegt, entsteht eine mittelschwere Sepsis; wird sie in der Nähe der Ileozäkalklappe platziert, resultiert eine schwere Sepsis. Der Schweregrad des Eingriffs spiegelt sich in der Mortalitätsrate wider.

Ligieren Sie niemals das Ileozökum. Führen Sie nun die Ligatur mit Seidenfaden unter Anlegen eines Doppelknotens durch, um sie festzuziehen. Halten Sie das Zäkum fest und perforieren Sie es vorsichtig nahe der Ligaturstelle, und führen Sie eine weitere Perforation näher am Ende des Zäkums durch. Die Membran des Zäkums ist weich und lässt sich sehr leicht perforieren.

Indem man Nadeln mit unterschiedlichen Dicken verwendet und eine oder zwei Perforationen vornimmt, kann man ebenfalls die Schwere des Modells modulieren. Die hier gezeigte Methode mit ein- oder zweifacher Punktion stellt eine alternative Technik zur klassischen Durchstich-Punktion dar. Der Vorteil der Methode mit ein- oder zweifacher Punktion besteht darin, dass man die Menge des austretenden Darminhalts besser kontrollieren kann, wenn der Darm gequetscht wird.

Halten Sie den Blinddarm mit zwei Fingern und schieben Sie vorsichtig den Blinddarm vor, um eine sehr geringe Menge Fäkalien zu entnehmen. Schließen der Laparotomie. Heben Sie dann das Peritoneum an und legen Sie den Blinddarm sorgfältig in die Bauchhöhle zurück.

Seien Sie äußerst vorsichtig, um versehentliche Einstiche in das Zäkum mit der Pinzette zu vermeiden; die Verwendung größerer Pinzetten wird empfohlen. Nun ist der Zeitpunkt gekommen, um die Bauchfellhöhle zu schließen. Verwenden Sie Seidenlitze und achten Sie sehr genau darauf, dass die Schließung vollständig und dicht erfolgt.

Wir beginnen an einer Seite der Wunde, wo wir einen Knoten anlegen. Führen Sie die Naht fort, bis zur anderen Seite, indem Sie das Seidenmaterial unter der Schlaufe der vorherigen Einstichstelle hindurchführen. Zum Verschließen der Haut können wir Mitchell-Wundklammern oder Reflexklammern unter Verwendung des geeigneten Werkzeugs zum Schließen der Klammern verwenden.

Platzieren Sie so viele Clips wie nötig, um sicherzustellen, dass die Wunde geschlossen ist. Revitalisieren Sie die Mäuse durch subkutane Injektion von einem Milliliter vorgewärmter Kochsalzlösung. Diese Flüssigkeitsersatzmaßnahme mittels einer 25-Gauge-Nadel wird die hyperdynamische Phase der Sepsis auslösen und das Verfahren abschließen.

Stellen Sie die Maus unter eine Infrarot-Heizlampe oder alternativ auf eine Heizplatte, bis die Maus sich von der Anästhesie erholt hat. Stellen Sie Futter und Wasser auf den Boden des Käfigs und überwachen Sie die Tiere alle acht bis zwölf Stunden auf Anzeichen von Erkrankungen. Injizieren Sie Buprenorphin subkutan zur postoperativen Schmerzlinderung.

Ein anderes schmerzstillendes Mittel, das verwendet werden kann, ist T. Tramadol. Anzeichen von Sepsis, Symptome einer Sepsis sind Fieber, Lethargie, Pelzveränderungen, Erektion, Durchfall, Zusammenkauern und Unwohlsein. Sehr kranke Tiere zeigen eine starke Abnahme der Körpertemperatur und bewegen sich kaum, um Leid zu vermeiden.

Sie sollten zu diesem Zeitpunkt euthanasiert werden, H. So führen wir die Sichel-Ligatur und das punktuelle Modell durch. Wir hoffen, Ihnen hat die Demonstration dieses Verfahrens gefallen und Sie fanden es sehr nützlich für Ihre Forschung, bevor Sie Ihre Tierversuche beginnen. Wir empfehlen nachdrücklich, alte oder unbenutzte Tiere zum Training zu verwenden, um den geeigneten Schweregrad für Ihre Experimente durch Anpassung der Länge der Ligatur, der Dicke der Nadel und der Anzahl der Punktionen zu etablieren.

Damit verabschieden wir uns.