Name: Bakterielle Immobilisierung für Imaging von Atomic Force Microscopy (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Erfahren Sie die bakterielle Immobilisierung für Atomic Force Microscopy in flüssiger Umgebung. Diese Methode nutzt gelatinebeschichtetes Glimmer zur zuverlässigen Fixierung lebender gramnegativer und grampositiver Bakterien für hochauflösende Bildgebung.

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Diese Forschung wird vom Amt für Biologische und Umweltforschung, US Department of Energy und durch Zuschüsse aus Virginia Commonwealth Health Research Board gesponsert. Oak Ridge National Laboratory wird von UT-Battelle, LLC, für den US-Department of Energy unter Vertrag Nr. DE-AC05-00OR22725 verwaltet.

1. Mica Zubereitung: <ol><li> Schneiden Sie den Glimmer (Electron Microscopy Sciences) mit einer Schere auf die Größe notwendig, die AFM-Mikroskop (ca. 22 × 30 mm) passen. </li><li> Cleave der Glimmer auf beiden Seiten, in der Regel mit Klebeband an die äußere Schicht zu entfernen, bis nur noch glatte ungebrochene Schichten bleiben. </li></ol> 2. Herstellung von Gelatine-Lösung: <ol><li> Add 100 ml destilliertem Wasser in ein Labor Flasche. </li><li> Erhitzen Sie die Flasche in der Mikrowelle bis das Wasser zu sieden beginnt. (Wenn eine Mikrowelle nicht zur Verfügung steht, kann das Wasser in einem Becherglas auf einer Heizplatte erhitzt werden.) </li><li> Abwiegen 0,5 Gramm der Gelatine (Sigma G-6144, G-2625 oder G-2500) und fügen Sie die heiße destilliertem Wasser. </li><li> Vorsichtig schwenken die Flasche, bis die Gelatine vollständig gelöst ist. </li><li> Kühlen Sie die Gelatine-Lösung auf 60-70 ° C. </li><li> Gießen Sie ca. 15 mL in ein kleines Becherglas (20 ml), in die der Schnitt gespaltenem Glimmer getaucht werden kann. </li></ol> 3. Mica-Beschichtung: <ol><li> Tauchen Sie die Glimmer Quadrate in die erwärmte Gelatinelösung und ziehen schnell, so dass die Glimmer beschichtet ist (Abb. 1a). </li><li> Nach der Beschichtung, die Unterstützung der Glimmer sofort, am Waldrand, auf einem Papiertuch, um in der Luft trocknen lassen (Abb. 1b). Die Gelatine beschichtete Glimmer kann für mindestens 2 Wochen verwendet werden. Die überschüssige Gelatine-Lösung kann im Kühlschrank aufbewahrt werden und für rund einen Monat durch einfaches Erhitzen der Stammlösung zwischen 60-70 ° C. Es muss darauf geachtet, dass die Gelatine nicht beim Erwärmen abgekocht werden. </li></ol> 4. Montage Bakterien auf Gelatine beschichtete Glimmer: <ol><li> Pellet 1 ml einer Bakterienkultur (0,5 bis 1,0 OD bei 600 nm) bei 800 bis 4.500 rcf. Je nach Bakterien, die mindestens rcf, dass die Pellets der Zellen in ca. 5 Minuten. </li><li> Waschen des Pellets in das gleiche Volumen der gefilterten deionisiertem Wasser oder Puffer. </li><li> Sammeln Sie die Zellen wieder abzentrifugiert. </li><li> Das Pellet sofort in 500 ul der Nanopure deionisiertem Wasser oder Puffer. (Die Bakteriensuspension sollte sichtbar trüb werden, um eine ausreichende Konzentration von Zellen für die AFM haben.) </li><li> Übernehmen Sie die Zellsuspension (10-20 mL), um die Gelatine-beschichtete Glimmer und verteilt auf der Oberfläche mit einer Pipettenspitze (Abb. 1c). Es sollte darauf geachtet werden, nicht körperlich berührt die Gelatine Oberfläche mit der Pipettenspitze während der Anwendung oder Verbreitung der bakteriellen Lösung sein. </li><li> Die Oberfläche für 10 Minuten ruhen lassen und gründlich mit einem Strom von Wasser oder Puffer (Abb. 1 cd). Während des gesamten Verfahrens darauf achten, dass die Probe nicht erlaubt ist, um zu trocknen. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse: Abbildung 2 zeigt beispielsweise Bilder von Bakterienzellen, die auf Gelatine beschichtete Glimmer wurden montiert und bebildert von AFM. In unseren Labors werden die Proben in der Regel abgebildet mit einem PicoPlus Rasterkraftmikroskop (Agilent Technologies, Tempel, AZ) mit einer 100 um Abtastkopf ausgestattet. Das Gerät ist bei 128-512 Pixel pro Zeile Scan bei einer Scan-Geschwindigkeit von 0,5-1,0 Linien / s betrieben Die Ausleger, die typischerweise verwendet werden, sind Veeco Siliziumnitrid-Sonden (MLCT-AUHW, Veeco, Santa Barbara, CA) mit nominal Federkonstanten zwischen 0,01 bis 0,1 nN / nm. <img src="/files/ftp_upload/2880/2880fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Gelatine bei einer Temperatur von 60-70 ° C in einer 20 ml Becherglas gegeben. Mit einer Pinzette frisch gespaltenem Glimmer Plätze sind völlig in die Gelatine (a) zurückgezogen und aufrecht auf einem Papiertuch gelehnt einer Mikrozentrifuge Rack (b) platziert eingetaucht. Ein Tropfen einer bakteriellen Probe wird auf dem Glimmer und verbreiten mit einer Pipettenspitze in der X-und Y-Richtung (c) platziert. Nachdem man die Probe auf die Glimmer-Oberfläche für mindestens 10 Minuten inkubieren, spülen Sie die Probe in einem Strom von destilliertem Wasser. Wenn die Immobilisierung arbeitete Sie in der Lage, um ein milchiger Fleck auf dem Glimmer zu sehen, wie auf der rechten Seite von (d) gezeigt. Wenn die Immobilisierung nicht funktioniert hat man ein klares Stück Glimmer als in der linken Seite zu bekommen. Die milchiger Fleck auf der Glimmerschuppen, um die Konzentration der Bakterien in den Tropfen, die Sie auf der Gelatine behandelten Glimmer. <img src="/files/ftp_upload/2880/2880fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. AFM-Aufnahmen von E. coli. In Panel (a) werden die Zellen auf Gelatine-beschichteten Glimmer montiert und abgebildet in 0,005 M PBS. Zum Vergleich wird ein Bild von Bakterienzellen auf Gelatine-beschichteten Glimmer montiert und abgebildet in der Luft in Panel (b) gezeigt. Obwohl Septen sind deutlich sichtbar in Bild flüssig, höhere Auflösung, als durch die Anwesenheit von Pili (kleines Panel (b)) angegeben, sammelte sich in Luft gewonnen werden.

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Verschiedene Faktoren können die mikrobielle Zelle Montage-und Imaging von AFM. Die Gelatine, die zur Beschichtung eingesetzt wird der Glimmer ist wichtig. Gewerbliche Gelatine wird aus einer Reihe von Wirbeltieren einschließlich Fischen, Kühen und Schweinen isoliert. Sowohl die Herkunft und das Verarbeitungsverfahren bestimmen die Gelatine die Eignung für die bakterielle Immobilisierung. Zahlreiche Quellen und Arten von Gelatine wurden auf ihre Wirksamkeit in Immobilisierung Bakterien untersucht [1]. Die beiden effekti...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Gelatine </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> G6144, G2625 oder G2500 </td></tr><tr><td> PicoPlus Atomic Force Microscope </td><td> Agilent Technologies, Tempe, AZ </td><td></td></tr><tr><td> AFM Cantilever </td><td> Veeco, Santa Barbara, CA </td><td> MLCT-AUHW </td></tr></tbody></table>

bakterielle immobilisierung für imaging von atomic force microscopy

Bacterial Immobilization for Imaging by Atomic Force Microscopy

AFM ist ein hochauflösender (nm-Skala) Imaging-Tool, das mechanisch tastet eine Oberfläche. Es hat die Fähigkeit, Bilder von Zellen und Biomolekülen, in einer flüssigen Umgebung, ohne die Notwendigkeit, chemisch behandeln die Probe. Um dieses Ziel zu erreichen, muss die Probe ausreichend, um die Montagefläche haften, um die Entfernung von Kräften von der Scan-AFM Cantileverspitze ausgeübt zu verhindern. In vielen Fällen hängt die erfolgreiche Bildgebung bei der Immobilisierung der Probe auf der Montagefläche. Optimalerweise sollten Immobilisierung werden minimal-invasive, um die Probe, so dass Stoffwechselvorgänge und funktionalen Eigenschaften nicht beeinträchtigt werden. Durch die Beschichtung frisch gespaltenem Glimmer Oberflächen mit Schweinen (Schweine-) Gelatine, können negativ geladene Bakterien auf der Oberfläche immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit, die durch AFM. Immobilisierung von Bakterienzellen auf Gelatine-beschichteten Glimmer ist sehr wahrscheinlich aufgrund von elektrostatischen Wechselwirkungen zwischen der negativ geladenen Bakterien und den positiv geladenen Gelatine. Mehrere Faktoren können mit bakteriellen Immobilisierung, einschließlich der chemischen Bestandteile der Flüssigkeit, in der die Bakterien ausgesetzt, die Inkubationszeit der Bakterien auf die Gelatine beschichtete Glimmer, Oberflächeneigenschaften des Bakterienstammes und dem Medium, in dem die Bakterien sind abgebildet stören. Insgesamt ist die Verwendung von Gelatine-beschichtete Glimmer gefunden allgemein anwendbar zu sein für die Bildgebung mikrobieller Zellen.

Live-Gram-negative und gram-positive Bakterien können auf Gelatine-beschichteten Glimmer immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit mit Atomic Force Microscopy (AFM).

Bakterielle Immobilisierung für Imaging von Atomic Force Microscopy

Die AFM ist ein hochauflösendes (nm-Skala) Bildgebungsverfahren, das eine Oberfläche mechanisch abtastet. Es ermöglicht die Abbildung von Zellen und Biomolekülen in einer Flüssigkeit ...

Die Rasterkraftmikroskopie oder ein FM verwenden eine mechanische Abtastung einer Oberfläche, um hochauflösende Bilder zu erzeugen, ohne dass die Probe chemisch behandelt werden muss. In diesem Video werden Bakterien auf mit Gelatine beschichtete Glimmeroberflächen immobilisiert und in einer flüssigen Umgebung mittels FM abgebildet. Zunächst werden Glimmerplättchen zugeschnitten, um auf die FM-Mikroskopplattform zu passen. Die oberste Schicht des Glimmers wird entfernt, und die Glimmerplättchen werden mit Gelatine beschichtet.Anschließend wird ein Tropfen bakterieller Suspension auf die mit Gelatine beschichtete Glimmerplatte gegeben und verteilt. Mit einer Pipettenspitze werden die Proben 10 Minuten lang inkubiert. Danach werden die nicht gebundenen Bakterien von der Oberfläche gewaschen.Die Probe wird in die A FM-Nasszelle gegeben und abgebildet, um hochauflösende Bilder lebender Bakterien zu erhalten. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der Mobilisierung auf porösen ISO-Filtern besteht darin, dass sowohl stäbchenförmige als auch kugelförmige Bakterien zuverlässig immobilisiert werden können. Außerdem ist ein größerer Prozentsatz der Zelloberfläche der A FM-Sonde zugänglich.Ein wesentlicher Vorteil der Atomkraftmikroskopie gegenüber anderen Mikroskopiemethoden besteht darin, dass Einzelzellstudien durchgeführt werden können, um die Zellmorphologie, die Septumbildung und die Zytokinese zu untersuchen. Personen, die neu in dieser Methode sind, haben Schwierigkeiten, weil sie oft Gelatine verwenden, die nicht nachgewiesen wurde, Bakterien zu immobilisieren, oder weil sie Bakterien in einem komplexen Medium kultivieren, dessen Bestandteile die Adhäsion der Bakterien an der Gelatinoberfläche beeinträchtigen können. Die Idee zu dieser Methode entstand aus Experimenten aus den 1970er Jahren, bei denen Bakterien immobilisiert wurden. Gelatinebeschichtete Objektträger für Experimente mit Lichtmikroskopie und Autoradiographie. In dieser Demonstration werden lebende gramnegative Bakterien für eine KM-Bildgebung fixiert, doch die Methode eignet sich ebenfalls für grampositive Bakterien. Um die MICA vorzubereiten, schneiden Sie diese zunächst mit einer Schere zu, sodass sie auf die KM-Mikroskopstufe passt und die KM-Nasszelle aufnehmen kann.Als Nächstes Klebeband auf die MICA-Oberfläche legen und abziehen, um die äußere Schicht des MICA vom Schnittstück zu entfernen. Fahren Sie fort, die äußere Schicht von beiden Seiten zu entfernen, bis nur noch glatte, unbeschädigte Schichten übrig bleiben. Um die Gelatine-Lösung vorzubereiten, geben Sie 100 Milliliter destilliertes Wasser in eine Laborflasche und erhitzen es in einer Mikrowelle.Wenn das Wasser zu kochen beginnt, nehmen Sie es aus dem Mikrowellenherd, geben Sie 0,5 Gramm Gelatine hinzu und schwenken Sie die Flasche vorsichtig, bis sich die Gelatine aufgelöst hat. Beachten Sie, dass Rinder-Gelatine für dieses Verfahren nicht gut geeignet ist. Schweine-Gelatine wird empfohlen.Stellen Sie die Flasche auf die Laborbank und lassen Sie sie auf 60 bis 70 Grad Celsius abkühlen. Gießen Sie anschließend eine ausreichende Menge der Gelatinelösung in ein kleines Becherglas, um sicherzustellen, dass die MICA vollständig mit einer Pinzette eingetaucht werden kann. Tauchen Sie ein MICA-Quadrat in die warme Gelatinelösung ein und ziehen Sie es sofort wieder heraus.Stellen Sie das MICA auf die Kante auf ein Papiertuch, das an einem Mikrozentrifugenständer angelehnt ist, um es über Nacht an der Luft trocknen zu lassen. Das mit Gelatine beschichtete MICA kann mindestens zwei Wochen lang verwendet werden. Falls das mit Gelatine beschichtete MICA einige Wochen lang nicht verwendet wird.Legen Sie es auf Filterpapier in eine abgedeckte Petrischale und lagern Sie es bei Raumtemperatur. Die überschüssige Gelatine-Lösung kann im Kühlschrank aufbewahrt und etwa einen Monat lang durch einfaches Erwärmen der Stammlösung auf 60 bis 70 Grad Celsius wiederverwendet werden. Dabei ist darauf zu achten, dass die Gelatine beim Erwärmen nicht gekocht wird.Vor dem Aufbringen der Bakterien auf mit Gelatine beschichtete MICA muss sichergestellt werden, dass die Bakterienkonzentration ausreichend ist. Verwenden Sie ein Spektrophotometer, um die optische Dichte der Bakterienprobe bei 600 Nanometern zu bestimmen. Ein OD-Wert von 0,5 bis 1 ist optimal.Überführen Sie anschließend ein Milliliter der Kultur in ein Mikrozentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie es, um den Pellet zu erhalten. Entfernen Sie das Überstandsmittel mit einer Pipette und waschen Sie den Pellet in einem Milliliter filtriertem, deionisiertem Wasser oder Puffer. Resuspendieren Sie vorsichtig durch mehrmaliges Auf- und Abpipettieren.Zentrifugieren Sie das Pellet, gewinnen Sie es ab und resuspendieren Sie das Pellet umgehend in 500 Mikrolitern nano-reinem, deionisiertem Wasser. Die bakterielle Suspension sollte sichtbar trüb sein, um eine ausreichende Zellkonzentration aufzuweisen. Für eine FM-Bildgebung.Falls osmotischer Schock eine Rolle spielt, können 0,25 molaren Saccharose der Bildgebungslösung zugesetzt werden. Ich habe diese Bakterien in Wasser resuspendiert, aber scheuen Sie sich nicht, andere Flüssigkeiten auszuprobieren. Beispielsweise haben wir dies mit 0,25 % Saccharose durchgeführt; probieren Sie daher andere Flüssigkeiten aus und prüfen Sie, ob diese ebenfalls funktionieren.Bereiten Sie zwei Objektträger für jede Probe vor. Geben Sie mit einer Mikropipette 10 bis 20 Mikroliter Zellsuspension auf die mit Gelatine beschichtete Oberfläche. Um anschließend eine ausreichende Fläche für eine FM-Bildgebung abzudecken, verwenden Sie eine Mikropipettenspitze, um den Tropfen in X- und Y-Richtung zu verteilen.Unter Vermeidung von physischem Kontakt der Gelatinoberfläche mit der Pipettenspitze die Probe 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Danach mit einem Wasserstrahl abspülen und überschüssige Flüssigkeit entfernen, indem man die Probe an den Rändern mit einem Papiertuch oder Filterpapier antupft. Eines der Objektträger anschließend schnell mit einem Strom von Stickstoffgas trocknen.Danach die Objektträger optisch überprüfen. Ein undurchsichtiger Fleck zeigt an, dass die Bakterien im Waschschritt nicht entfernt wurden. Der andere Objektträger, der nun für die Bildgebung verwendet wird, darf nicht austrocknen.Platzieren Sie es auf der A FM-Nasshalterung und befestigen Sie es mit den Klammern. Fügen Sie mithilfe einer Mikropipette Wasser auf die Nasshalterung hinzu. Es ist ratsam, das Atomkraftmikroskop vor der Bildgebung in Flüssigkeit vorzubereiten. Stellen Sie sicher, dass der Cantilever für die Bildgebung in Flüssigkeit in das A FM eingesetzt ist und mit dem Laser ausgerichtet ist.Fahren Sie mit der Bildgebung mittels Rasterkraftmikroskopie unter Verwendung eines Pico-Plus-Rasterkraftmikroskops fort, das mit einem 100-Mikrometer-Scankopf und Vico-Siliziumnitrid-Sonden mit nominellen Federkonstanten im Bereich von 0,01 bis 0,1 Nano-Newton pro Nanometer ausgestattet ist. Sobald das Mikroskop vorbereitet ist, setzen Sie den a-FM-Scanner und die Probe in das Mikroskop ein. Üblicherweise beginnen wir mit einer Bildgeschwindigkeit von 0,5 Zeilen pro Sekunde bis hin zu einer Zeile pro Sekunde, und die Auflösung wird von 128 Datenpunkten pro Zeile bis auf 512 eingestellt.Stellen Sie das Instrument so ein, dass Bilder mit 128 bis 512 Pixeln pro Zeile aufgenommen werden. Scannen Sie mit einer Scan-Geschwindigkeit von 0,5 bis einer Zeile pro Sekunde. Passen Sie anschließend gegebenenfalls den Sollwert und die Verstärkungen am A FM an, um optimale Bilder zu erzielen.Schließlich sammeln Sie die Bilder ein. E. coli-Bakterien wurden gemäß der Beschreibung in diesem Video auf mit Gelatine beschichtetem MICA aufgebracht und anschließend in 0,005 molarer PVS abgebildet. Mit dieser Methode.Szepter sind deutlich in dem aufgenommenen Bild erkennbar, und die Zelloberflächen sind glatt, ohne Anzeichen von Dehydrierung. Im Vergleich dazu zeigen Aufnahmen derselben E. coli in Luft, wie hier dargestellt, oft Strukturen, die in Flüssigkeit nicht sichtbar sind. In diesem Fall weisen die Zellen ein ringförmiges Aussehen aufgrund von Dehydrierung auf, und bakterielle Anhängsel wie FIA sind sichtbar.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man bakterielle Proben für eine FM-Bildgebung in einer flüssigen Umgebung vorbereitet. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie innerhalb von etwa einer Stunde durchgeführt werden, sofern die mit Gelatine beschichteten Mikrooberflächen zuvor vorbereitet wurden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, die richtige Gelatine auszuwählen und eine geeignete Bakterienkonzentration zu verwenden, nachdem das Verfahren befolgt wurde.Weitere Messungen, beispielsweise die Nutzung des FN-Kragarms als kraftmessendes Werkzeug zur Durchführung von Kraftmessungen an bakteriellen Oberflächen, können durchgeführt werden. Außerdem können spezifische Sondenmoleküle an die AFM-Spitze gekoppelt werden, um mit spezifischen Zielstrukturen auf der bakteriellen Oberfläche zu wechselwirken, um so Interaktionskräfte zu identifizieren und zu messen. Im Allgemeinen sollte man nicht vergessen, dass bei Arbeiten mit pathogenen Bakterien stets Vorsichtsmaßnahmen zu treffen sind, wenn diese Methode verwendet wird.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

A-Tapping-Modus Rasterkraftmikroskop (AFM)-Methode zur Visualisierung von Plasmid-DNA, cytoplasmatische Proteine ​​und DNA-Protein-Komplexen beschrieben. Das Verfahren umfasst das alternative Ansätze zur Vorbereitung der Proben für AFM folgenden biochemischen Manipulation. DNA mit spezifischen Protein interagiert Regionen sind in der Nähe-physiologischen Puffer Bedingungen beobachtet.

Visualisierung von rekombinanten DNA-und Protein-Komplexe mit Atomic Force Microscopy

Source: Williams, S. M. et al. Novel Atomic Force Microscopy Based Biopanning for Isolation of Morphology Specific Reagents against TDP-43 Variants in Amyotrophic Lateral Sclerosis. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates tapping-mode AFM to visualize phage–antigen interactions on a mica surface. It outlines the steps for antigen immobilization, phage binding, and high-resolution nanoscale imaging.

Atomic Force Microscopy to Visualize Phage–Antigen Interactions

Wir präsentieren ein Verfahren zum Erreichen einer Sub-Nanometer Auflösung Bilder mit Amplituden-Modulation (Tapping-Modus) Rasterkraftmikroskopie in Flüssigkeit. Das Verfahren ist auf kommerzielle Atomkraftmikroskope demonstriert. Wir erläutern die Gründe für unsere Entscheidungen von Parametern und schlagen Strategien zur Auflösung Optimierung.

Sub-Nanometer Auflösung Belichtung mit Amplituden-Modulation der Rasterkraftmikroskopie in Liquid

Dieses Protokoll beschreibt die kovalente Immobilisierung von Proteinen mit einer Heterobifunctional Silan Haftvermittler auf Siliziumoxid Oberflächen für die atomic Force Mikroskopie basierend Einzelmolekül Kraft Spektroskopie entwickelt die am Beispiel der Interaktion von RrgA (Pilus-1 Tipp adhäsin des Streptococcus Pneumoniae) mit Fibronektin.

Kovalente Immobilisierung von Proteinen für die Einzelmolekül-Spektroskopie Kraft

Wir beschreiben ein einfaches lithographischen Verfahren für die Immobilisierung von gen-Länge DNA-Molekülen auf einer Fläche, die zur zellfreien gen Ausdruck Experimente auf Biochips durchführen können.

Funktionale Oberfläche-Immobilisierung von Genen mit mehrstufigen Strang Verschiebung Lithographie

Wir präsentieren ein Protokoll zur Funktionalisierung von AFM-Auslegern (Atomic Force Microscope) mit einer einzelnen T-Zelle und einem Perlenteilchen für immunologische Studien. Gezeigt werden Verfahren zur Untersuchung der Einzelpaar-T-Zell-dendritischen Zellbindung durch AFM und zur Überwachung der echtzeitzellulären Reaktion von Makrophagen auf ein einzelnes Feststoffteilchen durch AFM mit Fluoreszenzbildgebung.

Funktionalisierung von Atomkraftmikroskop-Auslegern mit Einzel-T-Zellen oder Einzelpartikeln für die immunologische Einzelkraftspektroskopie

Dieses Protokoll zielt darauf ab, AFM-Messungen an Hunderten von mikrobiellen Zellen zu automatisieren. Zuerst werden Mikroben in PDMS-Stempelmikrostrukturen immobilisiert und dann werden kraftspektroskopische Messungen automatisch an Hunderten von immobilisierten Zellen durchgeführt.

Automatisierung von Bio-Rasterkraftmikroskop-Messungen an Hunderten von C. albicans-Zellen

Hier wird das Protokoll der Conpokal-Technik vorgestellt, das konfokale und atomare Kraftmikroskopie zu einer einzigen Instrumentenplattform vereint. Conpokal bietet die gleiche Zelle, die gleiche Region, fast gleichzeitige konfokale Bildgebung und mechanische Charakterisierung von lebenden biologischen Proben.

Nahezu simultanes Laserscanning Konfokal- und Atomkraftmikroskopie (Conpokal) auf lebenden Zellen

Rasterkraftmikroskopie-Infrarotspektroskopie (AFM-IR) bietet eine leistungsstarke Plattform für Bakterienstudien, die es ermöglicht, eine nanoskalige Auflösung zu erreichen. Sowohl die Abbildung subzellulärer Veränderungen (z. B. bei Zellteilung) als auch vergleichende Untersuchungen der chemischen Zusammensetzung (z. B. durch Arzneimittelresistenz) können auf Einzelzellebene in Bakterien durchgeführt werden.

Rasterkraftmikroskopie kombiniert mit Infrarotspektroskopie als Werkzeug zur Untersuchung der Chemie einzelner Bakterien

Hier stellen wir die Anwendung der Rasterkraftmikroskopie (AFM) als einfache und schnelle Methode zur bakteriellen Charakterisierung vor und analysieren Details wie die Bakteriengröße und -form, Bakterienkulturbiofilme und die Aktivität von Nanopartikeln als Bakterizide.

Kontaktmodus Rasterkraftmikroskopie als schnelle Technik zur morphologischen Beobachtung und bakteriellen Zellschadensanalyse

Erfahren Sie die bakterielle Immobilisierung für Atomic Force Microscopy in flüssiger Umgebung. Diese Methode nutzt gelatinebeschichtetes Glimmer zur zuverlässigen Fixierung lebender gramnegativer und grampositiver Bakterien für hochauflösende Bildgebung.

Bakterielle Immobilisierung für Imaging von Atomic Force Microscopy

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