Diagnostic Necropsy und ausgewählte Gewebe und Probenentnahme bei Ratten und Mäusen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Durchführung einer einfachen Nagetier-Autopsie. Dies wird erreicht, indem zunächst grundlegende Informationen über das Tier aufgezeichnet werden. Der zweite Schritt des Eingriffs besteht darin, die Eingeweide zu untersuchen.

Der dritte Schritt ist die Entnahme von Proben wie Organen oder mesenterialen Lymphknoten. Letztendlich kann der Gesundheitszustand eines Tieres durch Histopathologie oder andere Techniken bestimmt werden. Im Allgemeinen haben Menschen, die neu in der Durchführung einer Autopsie sind, Schwierigkeiten, da die Anatomie der Nagetiere bei der Arbeit erlernt wird.

Diese Methoden können helfen, zentrale Fragen zur Gesundheit von Tieren in einer Forschungskolonie zu beantworten. Die visuelle Demonstration dieser Techniken ist unerlässlich, da es Zeit braucht, um die Positionen verschiedener Gewebe zu erlernen und normales von abnormalem Gewebe zu unterscheiden. Bevor Sie das Tier einschläfern, sammeln Sie Informationen über seine Geschichte und notieren Sie seine aktuellen Merkmale wie körperliche Verfassung, Verhalten, Geschlecht, Alter, Gewicht, Belastung und so weiter.

Diese Aufzeichnung ist ein wichtiges Alter für die Person, die das Gewebe vor der Einschläferung des Tieres untersuchen wird. Stellen Sie sicher, dass geeignete persönliche Schutzausrüstung verwendet wird. Bereiten Sie eine Dissektion vor, brettern Sie eine Pinzette, eine Schere, Etiketten für Behälter, Fixiermittel, Medien und Sammelgefäße.

Nachdem Sie das Tier eingeschläfert haben, beurteilen Sie seinen körperlichen Zustand, prüfen Sie es auf Haut- und Fellanomalien, Abmagerung und Dehydrierung. Suchen Sie auch nach Hinweisen auf künstliche Manipulationen, Implantate oder chirurgische Narben am Tier. Untersuchen Sie anschließend mit einem Präpariermikroskop alle äußeren Öffnungen im Detail.

Dazu gehören Ohren, Augen, Nase, Mund, Anus und Genitalien. Legen Sie nun das Tier auf den Rücken auf das Sezierbrett, heben Sie seine Haut mit einer Pinzette an und schneiden Sie die Haut vom After bis zum Kinn mit einer Schere auf. Als nächstes reflektieren Sie die Haut zu den Seiten und schneiden die Bauchdecke und den Brustkorb durch.

Lege die Brusteingeweide frei, indem du zwei Schnitte seitlich an jeder Seite des Brustkorbs machst. Schneide das Zwerchfell ab. Entfernen Sie dann den Brustkorb, indem Sie die Oberseite des Brustbeins durchschneiden.

Untersuchen Sie nun die freiliegenden Brust- und Bauchorgane. Kennen Sie Farbveränderungen, ungewöhnliche Gerüche, Größe, Unterschiede und fehlende oder ausgerenkte Organe. Untersuchen Sie die Konsistenz der Organoberflächen und notieren Sie eventuelle Gewebemassen oder flüssigkeitsgefüllte Taschen.

Beachten Sie auch das Vorhandensein von Flüssigkeit in beiden Hohlräumen. Setzen Sie die Untersuchung mit dem Magen-Darm-Trakt fort. Untersuchen Sie das Mesenterium auf vergrößerte Lymphknoten oder Gewebemassen.

Beschreiben Sie den Inhalt des Magen-Darm-Trakts und prüfen Sie ihn sorgfältig auf verdickte Wände, Massen oder Blutungen. Um das Innere der Nieren zu untersuchen, verwenden Sie eine Klinge, um einen Längsschnitt der linken Niere und einen Querschnitt der rechten Niere außerhalb der Mitte der Mittellinie zu machen. Überprüfen Sie das Parenchym auf Anomalien.

Untersuchen Sie nun das Urogenitalsystem bei Männern. Identifiziere die Samenbläschen, die Hoden, den Nebenhoden, die Harnleiter und die Perusaldrüsen bei Frauen. Identifiziere die Gebärmutter, die Eierstöcke und die Harnleiter.

Untersuchen Sie das Urogenitalsystem auf Verstopfungen, Flüssigkeitstaschen, Blutungen oder andere Anomalien. Nach Abschluss dieser Untersuchungen isolieren und exzitieren Sie die Zielorgane für die weitere Untersuchung. In der Regel werden Herz, Leber, Nieren und Milz entnommen, wenn sie herausgeschnitten werden.

Tauchen Sie jedes Organ in ein Fixiermittel oder befolgen Sie die ersten Schritte eines Protokolls, das diese Gewebe erfordert, wie z. B. Einfrieren oder Immunhistochemie, um eine angemessene Fixierung zu erhalten. Im Allgemeinen werden Gewebe in ein Konservierungsmittel wie 10%NBF getaucht, in einem Verhältnis von 20 Volumen Fixiermittel zu einem Volumengewebe. Wenn Sie mit Ratten arbeiten, sammeln Sie das Bronchialaspirat vor dem Nasenaspirat.

Beginnen Sie damit, die Haut im Unterhautgewebe vom Halsbereich weg zu reflektieren und so die Speicheldrüsen und die Halsmuskulatur freizulegen. Entfernen Sie dann dieses Gewebe, um die Luftröhre freizulegen. Machen Sie einen drei Millimeter großen Schnitt in die Luftröhre und führen Sie eine Pipette mit einem Milliliter Probenflüssigkeit vierteljährlich in das Tracheallumen ein.

Spülen Sie die Probenahmeflüssigkeit dreimal langsam durch die Luftröhre in die Lunge. Entnehmen Sie dann die Probenahmeflüssigkeit und entfernen Sie die Pipette aus der Luftröhre. Nicht die gesamte Flüssigkeit kehrt in die Pipette zurück.

Wiederholen Sie daher den Vorgang, wenn mehr Flüssigkeit benötigt wird. Für Tests an Mäusen. Um eine Nasen- oder Bronchialaspiratprobe zu entnehmen, greifen Sie mit einer sterilisierten Schere auf die Nasen-Rachen-ATU zu.

Durchtrennen Sie das Schläfenkiefergelenk und reflektieren Sie den Unterkiefer vom Oberkiefer weg, wobei der Nasenrachen-Atu freigelegt wird, um das Nasenaspirat zu sammeln. Führen Sie eine Pipette mit einem Milliliter Probenflüssigkeit in den Nasenrachen der Maus oder in das Tracheallumen der Ratte ein. Die Pipette sollte nach vorne gerichtet und eingeschoben werden.

So berührt die Spitze den Nasengaumen. Dort angekommen, injizieren Sie langsam die Probenahmeflüssigkeit. Wenn die Flüssigkeit in die Nasenhöhle eindringt, bildet sie Menisken an der Nasenöffnung und sollte auch durch den durchscheinenden Mundgaumen sichtbar sein.

Wenn jedoch Flüssigkeit durch den Mund austritt, richten Sie die Pipette neu aus. Sobald die Probenahmeflüssigkeit vollständig injiziert ist, ziehen Sie die Probenahmeflüssigkeit aus der Nasenhöhle in die Pipette und entfernen Sie dann die Pipette. Beginnen Sie damit, die Luftröhre mit einer Pinzette zu fassen und direkt über der Pinzette durchzuschneiden.

Ziehen Sie dann die Luftröhre vorsichtig nach oben und schneiden Sie die Gewebeverbindungen ab, bis das gesamte Brustgewebe herausgeschnitten werden kann. Legen Sie nun die Lunge flach auf die Arbeitsfläche und binden Sie locker ein Stück Naht oder Schnur um die Luftröhre. Ziehen Sie den Knoten nicht fest, sonst können Sie die Nadel nicht in die Luftröhre einführen.

Füllen Sie nun eine Spritze mit Fixiermittel und führen Sie die Nadel in die Öffnung der Luftröhre ein, während Sie die Luftröhre an der Nadel befestigen. Füllen Sie die Lungen mit einer Pinzette langsam mit Fixiermittel, bis sie vollständig aufgeblasen sind. Die Menge des Fixiermittels variiert je nach Alter, Belastung und Gesundheit des Tieres.

Wenn zu wenig aufgeblähtes Gewebe flach erscheint, wenn es zu stark aufgebläht ist, sickert nach dem Befüllen schaumige Flüssigkeit aus dem Gewebe, ziehen Sie das Nahtmaterial oder die Schnur, die die Luftröhre umgibt, fest, um einen Rückfluss des Fixiermittels aus der Lunge zu verhindern. Legen Sie dann die aufgeblasene Lunge in ein Fixiermittel. Legen Sie den Schlachtkörper auf ein sauberes Sezierbrett in Bauchliege und entfernen Sie mit Schere und Pinzette die Haut und den Muskel über dem Kalb.

Dann den Kadaver mit einer kleinen Schere enthaupten. Führen Sie die untere Klinge in das Foramen magnum ein und schneiden Sie die Mittellinie des Kalbes mit einer Aufwärtsbewegung durch. Legen Sie nun das Gehirn mit einer Pinzette frei, indem Sie den Kalb aufziehen.

Wenn der Pathologe es vorzieht, Teile des Gehirns im Schädel zu schneiden, platzieren Sie den Schädel mit freiliegendem Gehirn sofort in 10%NBF. Andernfalls fassen Sie den Kopf mit einer Pinzette oder einem Finger um die Nase und drehen Sie den Schädel vorsichtig um, so dass das Gewebe durch die Schwerkraft vom Schädel fallen kann. Sorgfältig. Schieben Sie die Kurvenzange entlang des äußeren Randes des Gehirns, beginnend an den Riechlappen.

Schieben Sie die Pinzette weiter entlang des Schädels in Richtung Kleinhirn, während Sie die Nerven mit der gleichen Pinzette sanft einklemmen. Wenn das Gehirn den Platz in das Fixiermittel freigibt, lokalisieren Sie zuerst die mesenterialen Lymphknoten, lokalisieren Sie das große comm-förmige Secum des Darms. Die mesenterialen Lymphknoten sind die gelben eiförmigen oder kugelförmigen Gewebeklumpen im Mesenterium neben dem Blinddarm.

Sie sind oft etwas dicker und fester in der Textur als das umgebende Mesenterium und Fett. Ein Präparierfernrohr kann zunächst nützlich sein, um Gewebe zu unterscheiden, aber mit der Erfahrung wird es nicht notwendig sein. Isolieren Sie die mesenterialen Lymphknoten mit einer Pinzette und einer Schere und übertragen Sie sie dann in ein Lagerröhrchen, um sie für Kultur, PCR oder Histopathologie zu verwenden.

Nach Abschluss des Protokolls steht einem Pathologen oder Wissenschaftler Folgendes zur Verfügung, ein schriftlicher Bericht über den objektiven und subjektiven Zustand bei der Euthanasie. Eine objektive Beschreibung des Gewebes vor ihrer Fixierung, aller wichtigen Bauch- und Thoraxorgane im Fixiermittel, des Gehirns und der mesenterialen Lymphknoten sowie Proben von Nasen- und Bronchialaspiraten. Einmal gemeistert, kann eine verkürzte Autopsie weniger als 30 Minuten dauern.

Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, Ihre Beobachtungen über den Zustand des Tieres und seines Gewebes aufzuzeichnen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie eine vollständige Nagetier-Autopsie durchführen, einschließlich der Entnahme von durchbluteten Lungen, mesenterialen Lymphknoten und dem Gehirn.