JoVE Encyclopedia of Experiments
Krebsforschung
0 Ansichten • 3:23 Min. • April 30th, 2023
Bereiten Sie zunächst ein betäubtes weibliches Kaninchen in der dorsalen Position vor. Machen Sie einen chirurgischen Schnitt durch die Bauchdecke, um die Bauchhöhle freizulegen. Lokalisiere die Gebärmutterhörner. Diese röhrenförmigen Strukturen sind analog zu zwei unterschiedlichen Gebärmutterstrukturen, die sich von den Eileitern erstrecken und sich auf beiden Seiten in zwei separate Gebärmutterhals öffnen. Binden Sie die Gebärmutterhörner auf beiden Seiten chirurgisch an einer Stelle näher an den Gebärmutterhals ab, um die distalen Uterushornregionen zu isolieren.
Injizieren Sie nun eine stark metastasierende gewünschte Tumorzellsuspension in das Myometrium oder die äußere Muskelschicht der Gebärmutter an einer Stelle zwischen der Nahtstelle und dem Gebärmutterhals. Lege die Gebärmutterhörner wieder in den Bauch. Schließen Sie den Schnitt und lassen Sie das Kaninchen sich erholen. Innerhalb weniger Tage nach der Injektion entwickelt sich an der Injektionsstelle ein Tumor. Die Zellen dieses Tumors mit hohem Metastasierungspotenzial können durch das Lymphsystem wandern und in Lymphknoten extravasieren, was zu Lymphknotenmetastasen führt.
Verwenden Sie eine Skalpellklinge mit der Nummer 11, um einen 2,5 Zentimeter langen Schnitt zu machen, 1 Zentimeter Schädel zur Symphyse durch die Haut und das Unterhautgewebe. Schneiden Sie die Rektusfaszie und präparieren Sie die Rektusmuskeln lateral, um das darunter liegende Peritoneum freizulegen. Vergewissern Sie sich, dass die Unterseite frei von Darm oder anderen Bauchorganen ist. Stechen Sie scharf in das Peritoneum ein, um die Harnblase zu identifizieren, und streichen Sie mit einem behandschuhten Finger nach oben, hinten und seitlich über die Spitze der Blase, um die Gebärmutterhörner zu lokalisieren.
Ziehen Sie die Gebärmutterhörner durch den Bauchschnitt heraus, um auf der Bauchdecke zu ruhen. Verwenden Sie eine 3-0 geflochtene resorbierbare Naht, um eine einzelne Nahtligatur jedes Gebärmutterhorns durchzuführen, etwa 1,5 bis 2 Zentimeter distal der Gebärmutterhals und nur medial der Gebärmutterarterien. Binden Sie dann die Nähte fest, um die distalen Gebärmutterhörner zu verschließen.
Um das Myometrium mit der zuvor vorbereiteten VX2-Zellsuspension zu beimpfen, laden Sie eine 1-Milliliter-Spritze, die mit einer 27-Gauge-Nadel ausgestattet ist, mit 1 Milliliter Zellen. Injizieren Sie langsam 0,5 Milliliter der Zellsuspension über einen Zeitraum von 1 Minute in jedes Gebärmutterhorn proximal der Nahtstelle zwischen Naht und Gebärmutterhals. Üben Sie dann 30 Sekunden lang Druck auf die myometriale Injektionsstelle aus, um Zellleckagen zu minimieren. Untersuchen Sie die Injektions- und Nahtstellen auf Blutstillung, bevor Sie die Gebärmutterhörner wieder in den Bauch einsetzen.