Proximales Kultursystem: Eine In-vitro-Kulturtechnik zur Untersuchung der parakrinen Signalübertragung zwischen Zellen

Bei der parakrinen Signalübertragung produzieren und sezernieren Zellen Signalmoleküle, die Reaktionen in benachbarten Zellen hervorrufen. Um die parakrine Signalübertragung nachzuahmen, beginnen Sie mit der Herstellung von Einzelzellsuspensionen von Eierstockkrebszellen und Mesothelzellen in ihrem geeigneten Medium.

Nehmen Sie als Nächstes einen umgekehrten porösen membranösen Einsatz in einer sterilen Kulturschale. Pipettieren Sie die Krebszellsuspension auf die Unterseite der Einsteckmembran, um eine Flüssigkeitskuppel zu bilden. Inkubieren, damit sich die Zellen absetzen und an der Membran anheften können.

Drehen Sie den Einsatz um, um das Medium abzulassen. Übertragen Sie den Einsatz in eine frische Kulturschale mit Wachstumsmedien, um die Krebszellen zu nähren, die an der Unterseite der Membran haften. Geben Sie nun die mesotheliale Zellsuspension in die Einsatzvertiefung. Inkubieren, damit die Zellen an der gegenüberliegenden Seite der Membran haften können, wodurch ein direkter Kontakt zwischen den beiden Zelltypen verhindert wird.

Während der Kultur sezernieren beide Zelltypen Signalfaktoren. Diese Moleküle diffundieren durch die poröse Membran zu den Nachbarzellen. Sie bi