Mesothelialer Clearance-Assay: Eine in vitro Technik zur Quantifizierung der Invasionsfähigkeit von Eierstockkrebs-Sphäroiden in mesotheliale Zellmonoschichten

Während der Metastasierung von Eierstockkrebs lösen sich bösartige Zellen von der primären Tumorstelle und beginnen in der Bauchhöhle zu zirkulieren. Diese Zellen können dann Cluster oder Sphäroide bilden, die an der Monoschicht der Mesothelzellen haften, die die Bauchhöhle auskleiden. Wenn der Tumor wächst, beseitigt er die darunter liegenden Mesothelzellen, um die Invasion zu erleichtern.

Um die mesotheliale Clearance zu modellieren, beginnen Sie mit der Aussaat von Mesothelzellen, die grün fluoreszierendes Protein oder GFP exprimieren, in eine mit Fibronektin beschichtete Kulturschale mit Glasboden. Die Fibronektin-Beschichtung sorgt für eine Matrix, die die Zelladhäsion fördert. Inkubieren Sie die Schale, damit sich die Mesothelzellen ausbreiten und eine Monoschicht bilden können.

Übertragen Sie als Nächstes eine Suspension von Eierstockkrebszell-Sphäroiden, die rot fluoreszierendes Protein exprimieren, auf die mesotheliale Monoschicht. Bilde die Kultur über einen längeren Zeitraum mit Hilfe der Zeitraffer-Fluoreszenzmikroskopie. Die rot fluoreszierenden Sphäroide setzen sich ab und binden sich an die grün fluoreszierende mesotheliale Monoschicht.

Die Krebszellen üben Kraft auf