Transplantationsassay für Eierstockfettpolster: Eine In-vivo-Technik zur Einführung von Zellen in das Eierstockfettpolster in Mausmodellen

Die Transplantation ermöglicht die Implantation von Zellen oder Gewebefragmenten in bestimmte Körperstellen eines Empfängertieres. Es hilft uns, die Rolle der Mikroumgebung bei der Tumorentstehung und Metastasierung zu untersuchen.

Bereiten Sie zunächst eine anästhesierte, immungeschwächte weibliche Maus in Bauchlage vor. Machen Sie einen chirurgischen Schnitt in der dorsomedialen Position, um den Fortpflanzungstrakt freizulegen. Lokalisieren Sie die Fettpolster der Eierstöcke, die sich in der Nähe des Eierstocks und des Eileiters befinden. Machen Sie mit einer scharfen Nadel einen Schnitt, der die Hälfte des Fettpolsters durchsticht, ohne den Eierstock zu beeinträchtigen.

Als nächstes injizieren Sie eine gekühlte Suspension von Versuchszellen, gemischt mit einer geeigneten Basalmembranmatrix, in den Fettpad-Schnitt. Lassen Sie die Matrix sich verfestigen und sichern Sie die Zellen im Inneren. Legen Sie das Eierstockfettpolster wieder in das Bauchfell und nähen Sie den Schnitt. Lassen Sie die Maus wiederherstellen.

Bei erfolgreicher Transplantation bietet das Fettpolster eine geeignete Mikroumgebung, die die Expansion der injizierten Zellen erleichtert. Überprüfen Sie die Maus wöchentlich, um das Wachstum transplantierter Zellen auf dem Fettpolster der Eierstöcke zu beobachten.

Nachdem Sie eine syngene Maus gemäß dem Textprotokoll anästhesiert haben, rasieren Sie mit der Haarschneidemaschine Nummer 40 einen Bereich, der doppelt so groß ist wie der chirurgische Bereich. Verwenden Sie Povidon-Jod, gefolgt von 70% Ethanol, um drei chirurgische Peelings durchzuführen. Bewegen Sie das Tier anschließend unter ein Präpariermikroskop.

Machen Sie dann mit einem Skalpell einen Schnitt in dorsomedialer Position direkt über dem Eierstockfettpolster und legen Sie den Fortpflanzungstrakt frei. Decken Sie die Fläche anschließend mit einem sterilen Tuch ab. Ziehen Sie anschließend mit einer stumpfen, feinen Pinzette das Eierstockfettpolster vorsichtig durch den Einschnitt in Richtung Mittellinie, um die Schädigung der Nerven und der wichtigsten Blutgefäße zu minimieren.

Um eine Wachstumsverzögerung von Transplantaten zu verhindern, sollte der Schnitt des Fettpolsters so präzise wie möglich erfolgen, da das Reißen oder Durchstechen des Fettpolsters ganz zu Blutungen führt. Bei Bedarf sollten Gerinnungsmittel verwendet werden, um Blutungen zu stoppen.

Verwenden Sie eine abgeschrägte Nadel mit 28 Gauge, um einen 2 bis 4 Millimeter tiefen Schnitt in das Fettpolster der Eierstöcke zu machen, 3 bis 4 Millimeter über dem Eierstock, und stellen Sie sicher, dass die Nadel nur etwa zur Hälfte durch das Fettpolster geht. Füllen Sie für Zelltransplantationen eine Spritze mit einer 30-Gauge-Nadel mit 10 bis 20 Mikrolitern der Zell-Basalmembran-Matrix-Mischung und injizieren Sie sie in den Fettpampenschnitt.

Nehmen Sie bei der Transplantation des Gebärmutterkanüls den Eileiter mit einer feinen Pinzette auf und legen Sie ihn in 10 bis 20 Mikroliter Basalmembranmatrix, die auf Eis aufbewahrt wird. Nehmen Sie dann mit einer 0,1 bis 10 bis 20 Mikroliter XL-Verlaufsfilterspitze das Gewebe und die Basalmembran-Matrix-Suspension auf und geben Sie sie in den Fettpolsterschnitt ab. Warten Sie fünf Minuten, bis sich die Basalmembranmatrix verfestigt hat, und platzieren Sie den Fortpflanzungstrakt wieder in das Peritoneum.

Schließen Sie mit zwei Stichen chirurgischer Naht die Muskeln und verwenden Sie kleine Wundclips oder chirurgische Nähte, um die Haut zu schließen. Lassen Sie das Tier nach der Transplantation gemäß dem Textprotokoll genesen.

• Syngeneic Mouse - A mouse that is genetically identical or of the same genotype.
• Anesthetization - The process of causing anesthesia, typically through drugs.
• Ovarian Fat Pad - Fatty tissue surrounding the ovaries in female mammals.
• Surgical Drape - Sterile fabric used during surgery to isolate the surgical site.
• Coagulant - A substance that encourages blood to clot, halting bleeding.

• Anesthetizing a syngeneic mouse occurs prior to surgery (e.g., dorsal fat pad).
• Shaving and surgical scrub is used for cleanliness (e.g., a1413202).
• Fine forceps are used to position the ovarian fat pad (e.g., surgical drape).
• Bleeding is stopped with coagulants when necessary (e.g., ovarian fat pad).

• [Question 1] What steps are taken when anesthetizing a syngeneic mouse?
• [Question 2] How is the ovarian fat pad exposed during surgery?
• [Question 3] What is the application of coagulants in the surgical procedure?

• The process has real-world applications in medical surgery (e.g., coagulant).
• It has an important impact within the biomedical research industry (e.g., syngeneic mouse).
• This technique can be used in studies related to female reproductive health (e.g., ovarian fat pad).
• The method is a significant advancement in transplantation surgeries (e.g., a1413202).