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Krebsforschung
0 Aufrufe • 3:26 Min. • April 30th, 2023
Die chorioallantoische Membran des Huhns (CAM) ist eine stark vaskularisierte Membran, die in den Eiern bestimmter Wirbeltiere wie Hühner vorkommt. Diese extraembryonale Membran kleidet eine nicht-vaskuläre Schalenmembran aus und fungiert als Ort des Austauschs von gasförmigem Sauerstoff und Kohlendioxid zwischen dem Embryo und der Umwelt.
Um ein CAM-Krebsmodell zu erstellen, beginnen Sie mit einem lebensfähigen, befruchteten Hühnerei mit einem voll entwickelten CAM und einer teilweise geöffneten Schale, die das verzweigte Gefäßsystem freilegt. Vergewissern Sie sich, dass sich das CAM von der Schalenmembran gelöst hat.
Legen Sie einen sterilen Antihaftring über einen Blutgefäßverzweig. Reiben Sie mit einem Glasstab vorsichtig über die Membran im Inneren des Rings, um die äußere Epithelschicht abzukratzen und die darunter liegende mesodermale Schicht, die das Gefäßsystem trägt, freizulegen. Pipettieren Sie eine gekühlte Suspension von Krebszellen, gemischt mit einer geeigneten extrazellulären Matrix, in den Ring. Der Ring schränkt die zelluläre Ausbreitung ein.
Lassen Sie die Matrix erstarren, um die Zellen darin zu sichern. Verschließen Sie die Öffnung der Eierschale und brüten Sie das Ei unter geeigneten Bedingungen aus. Das dichte Gefäßsystem innerhalb der mesodermalen Schicht versorgt die Krebszellen mit Sauerstoff und essentiellen Nährstoffen und bietet so eine geeignete Mikroumgebung für ihr Wachstum und ihre Expansion.
Um eine Krebszellsuspension für die Transplantation vorzubereiten, ernten Sie die Zellen aus der interessierenden Krebszellkultur und sedimentieren Sie die Zellen durch Zentrifugation. Aspirieren Sie den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen mechanisch im Restmedium. Legen Sie die Zellsuspension auf Eis und messen Sie mit einer Pipette das Volumen der Zellen im Medium. Dann resuspendieren Sie die Zellen in einer Konzentration von 1 bis 2 Millionen Zellen in 20 bis 100 Mikrolitern Medium, ergänzt mit 2,7 bis 4 Milligramm pro Milliliter extrazellulärer Matrix und allen Wachstumsfaktoren oder anderen interessanten Zusatzstoffen.
Legen Sie für die Implantation von Krebszellen mit einem Antihaftring bis zu 6 zu implantierende Eizellen auf das Eiergestell und rollen Sie die Ränder des transparenten Folienverbandes in Richtung des offenen Fensters, um die Folie von den Schalen zu entfernen. Prüfen Sie, ob die Eier lebensfähig und gesund sind. Ideale Eier haben ein großes Gefäß mit kleineren, verzweigten Gefäßen in der Mitte des geöffneten Bereichs.
Platzieren Sie mit einer gebogenen Irispinzette einen sterilen Antihaftring auf dem CAM über dem Gefäß, idealerweise über einer Abzweigstelle. Verwenden Sie einen sterilen Rührstab aus Glas, um das CAM vorsichtig abzuschleifen und die Krebszellsuspension in die Mitte des Rings zu pipettieren. Wenn alle Zellen abgegeben wurden, verschließen Sie die Öffnung mit einem ein Viertel Stück 6 x 7 Zentimeter großen transparenten Folienverband und beschriften Sie die Eizelle mit einer entsprechenden Implantatkennzeichnung. Legen Sie dann das Ei sicher in den Brutkasten, wobei die Öffnung der Schale nach oben zeigt.