Prostata-Organoid-Assay: Eine auf Matrixgel-Ringen basierende Ex-vivo-Kulturtechnik zur Untersuchung der Differenzierungsfähigkeit von Prostata-Epithelzellen

0 Aufrufe • 4:16 Min. • April 30th, 2023

Das Prostataepithel besteht hauptsächlich aus basalen und luminalen Epithelzellen. Eine Monoschicht aus Basalzellen bildet die äußere Auskleidung der Drüse und unterstützt das Überleben der Leuchtzelle. Umgekehrt kleiden die luminalen Zellen das Lumen aus und sezernieren prostataspezifische Proteine.

Um die Differenzierung des Prostataepithels ex vivo zu untersuchen, beginnen Sie mit einer Suspension von basalen Prostataepithelzellen. Mischen Sie die Suspension mit einer gekühlten Basalmembranmatrix im gewünschten Verhältnis. Pipettieren Sie diese Mischung neben dem Boden der Innenwand einer Zellabweisungs-Kulturplatte. Schwenken Sie die Platte für die Mischung, so dass ein Ring entlang des Umfangs der Vertiefung entsteht.

Inkubieren Sie die Platte, damit sich die Matrix verfestigen kann. Ergänzen Sie die Kultur mit einem bevorzugten Medium. Die Wachstumsfaktoren in den Medien unterstützen die Vermehrung von Basalepithelzellen. Gleichzeitig verhindert die zellabweisende Natur der Kulturschale jegliche Zellanheftung und regt die Zellen an, 3D-Sphäroide innerhalb der Matrix zu bilden.

Im Laufe der Zeit entwickeln die Sphäroide Lumen, die von mehrschichtigem Epithel begrenzt sind. Die

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