Proteinlysat-Extraktion: Eine Technik zur Lyse von Organoiden zur Sammlung zellulärer Proteine

Zelllysat, also die Flüssigkeit, die den lysierten Zellinhalt enthält, findet Anwendung in nachgelagerten Prozessen wie Proteinextraktionen und -analysen. Die Untersuchung dieser Fraktionen gibt Aufschluss über die Eigenschaften und Funktionen von Zellen.

Um Organoid-Proteinlysate herzustellen, beginnen Sie mit einer Kultur von Organoiden, die in einer gewünschten Basalmembranmatrix gezüchtet werden. Nehmen Sie das verbrauchte Nährmedium aus der Schale. Geben Sie warme Medien, die Proteasen enthalten, über die Matrix. Wiederholen Sie das Pipettieren, um die Matrize aus der Schale zu lösen.

Inkubiere die Mischung. Die proteolytischen Enzyme im Medium bauen die Matrix ab und geben die Organoide an die Lösung ab. Die Probe wird zentrifugiert, um Organoide von dem enzymhaltigen Überstand zu trennen.

Resuspendieren Sie das Organoid-Pellet in einem geeigneten Proteinlysepuffer. Inkubieren Sie die Probe. Die Detergenzien im Puffer zerstören die Zellmembranen der Organoide und geben intrazelluläre Inhalte an die Lösung ab. Gleichzeitig inaktivieren die Proteininhibitoren im Puffer alle freigesetzten Protease- und Phosphataseenzyme und verhindern so den Abbau ihrer Substratproteine.

Beschal