Intraprostatische Injektion von Krebszellen: Eine Technik zur Verabreichung von Krebszellen zur Etablierung eines orthotopen Prostatakrebs-Mausmodells

Bei der intraprostatischen orthotopen Tumorinjektion werden Tumorzellen, die dem Histotyp des Prostatagewebes entsprechen, direkt in die Prostata des Empfängertieres abgegeben.

Bereiten Sie zunächst eine betäubte männliche Maus in Rückenlage vor. Machen Sie einen Bauchschnitt in der Mittellinie und präparieren Sie die innere Muskulatur, um die Bauchhöhle freizulegen. Lokalisieren Sie einen der vorderen Prostatalappen. Diese Prostatalappen sind an der kleinen Krümmung der Samenbläschen befestigt und liegen nahe der Harnblase.

Injizieren Sie nun eine gekühlte Suspension von Prostatakrebszellen, gemischt mit der gewünschten Basalmembranmatrix, in die Längsachse des vorderen Prostatalappens. Stellen Sie sicher, dass die Zellsuspension vollständig abgegeben wird, und ziehen Sie die Nadel vorsichtig zurück. Lassen Sie die Matrix sich verfestigen und betten Sie die Zellen darin ein.

legen Sie den Prostatalappen zusammen mit der Samenblase wieder in die Bauchhöhle ein. Vernähen Sie den chirurgischen Schnitt. Lassen Sie die Maus wiederherstellen. Kontrollieren Sie die Maus wöchentlich, um das Wachstum von orthotopen Tumoren im vorderen Prostatalappen zu beobachten.

Nachdem Sie bestätigt haben, dass Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren, tragen Sie Salbe auf die Augen der Maus auf und rasieren Sie das gesamte Fell vom Bauch des Tieres. Sterilisieren Sie die exponierte Haut mit drei Runden chirurgischem Peeling mit sterilen, nicht haftenden Pads, gefolgt von sterilen Alkoholtupfern. Wenn die Haut trocken ist, legen Sie die Maus in Rückenlage auf eine saubere Oberfläche über einem Heizkissen direkt unter dem Objektiv eines sauberen Operationsmikroskops und bedecken Sie das Tier mit einem sterilen Tuch mit einem kleinen Loch über dem Bauch.

Machen Sie einen 1 Zentimeter langen Schnitt in der Außenhaut und der inneren Bauchmuskulatur entlang der Mittellinie des Bauches oberhalb des Penis und der Präputialdrüsen. Lokalisieren Sie eines der beidseitigen Samenbläschen und die daran befestigten vorderen Prostatalappen, die typischerweise posterior, lateral und etwas oberhalb der Blase liegen. Bitten Sie einen Assistenten, die Myc-CaP-Matrigel-Krebszelllösung durch sanftes Pipettieren zu mischen und langsam 30 Mikroliter Zellen in eine 28-Gauge-Nadel zu aspirieren, die an einer 50-Mikroliter-Spritze befestigt ist.

Heben Sie dann mit einer Graefe-Gewebezange vorsichtig die Spitze eines Samenbläschens an, um Spannung auf dem Gewebe zu erzeugen, ohne das Vesikel zu punktieren, und führen Sie die Abschrägung der Nadel vorsichtig parallel zur Längsachse des vorderen Prostatalappens ein. Injizieren Sie langsam das gesamte Zellvolumen in den Lappen, gefolgt von einem langsamen Zurückziehen der Nadel, um ein Auslaufen zu verhindern.

Eine erfolgreiche Injektion macht sich durch eine Schwellung des inneren Prostatalappens bemerkbar. Halten Sie das Samenblasen und den injizierten Prostatalappen vorsichtig und gleichmäßig etwa 30 Sekunden lang außerhalb der Maus, damit sich das Matrigel teilweise im Lappen verfestigen kann. Verwenden Sie einen sterilen Applikator mit Polyesterspitze, um austretende Zelllösung in den Bauch aufzufangen, um die Entwicklung eines nicht-orthotopen Tumors zu verhindern.

Eine genaue intraprostatische Injektion ist entscheidend für die orthotope Tumorentwicklung. Wenn Sie besonders darauf achten, dass die Samenblase nicht durchstochen wird, die Krebszellsuspension langsam injiziert und eventuelle Zellleckagen aufgefangen werden, wird der Erfolg dieses Verfahrens erhöht.

Bringen Sie nun die Samenblase und den injizierten Lappen vorsichtig in den Bauch zurück, ohne Druck auf den Lappen auszuüben, und ersetzen Sie das externalisierte Gewebe. Mit 5-0 vicryl resorbierbaren Reverse-Cutting-Nadelnähten die innere Bauchmuskulatur mit durchgehenden Stichen verschließen, gefolgt von einem Verschluss der äußeren Bauchhaut mit unterbrochenen Stichen mit 4-0 Nylon-Monofilamenten, nicht resorbierbaren Reverse-Cutting-Nadelnähten.

Verabreichen Sie dann eine postoperative Analgesie und setzen Sie die Maus in einen Käfig ohne Einstreu auf halbem Weg auf ein Heizkissen mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung.

• Prostate Cancer Model - A lab representation to study the progression & treatment of prostate cancer.
• Intraprostatic Injection - Technique of injecting medication or solution directly into the prostate.
• Matrigel - A gelatinous protein matrix used in tumor cell research.
• Orthotopic Tumor Model - Study model wherein tumor cells are implanted in their original organ.
• Seminal Vesicles - Male reproductive glands located near the prostate, integral to the injection procedure.

• Introduce Prostate Cancer Model – Biological method to examine prostate cancer (e.g., intraprostatic injection).
• Key Concepts – Involve steps like shaving, sterilizing, incising and suturing (e.g., prostate biopsy procedure video).
• Underlying Mechanisms – Seminal vesicles and anterior prostate lobes are involved (e.g., prostate cancer real images).
• Connect to Experiment – Demonstrate how injections ensure successful tumor implantation within prostate.

• What is intraprostatic injection used for in a prostate cancer model?
• How is the matrigel cancer cell solution involved in the procedure?
• Why is careful handling of seminal vesicles and prostate lobes crucial in this experiment?

• Practical Applications – Used in surgical training and cancer treatment research (e.g., prostate cancer injection).
• Industry Impact – Benefits medical industries, particularly oncology and urology (e.g., injection for prostate cancer).
• Societal Importance – Advancement in prostate cancer treatment techniques (e.g., injection prostate).
• Link to Scientific Advancements – Continuous improvement of prostate cancer models for research.