ADI-basierte Autophagie-Induktion in Prostatakrebszellen: Eine enzymbasierte Technik zur Messung der Autophagiereaktion in Zellen

Autophagie ist ein intrazellulärer Prozess, der den Abbau unerwünschter zytoplasmatischer Komponenten und Organellen in spezialisierten Verdauungskompartimenten, den Lysosomen, erleichtert. Um die Autophagie zu beurteilen, beginnen Sie mit einer adhärenten Kultur von Prostatakrebszellen, die autophagische Markerproteine namens LC3 exprimieren, die an grün fluoreszierende Proteine gekoppelt sind.

Prostatakrebszellen fehlt von Natur aus das Enzym Argininosuccinat-Synthase, das für die Arginin-Aminosäuresynthese notwendig ist. Diese Zellen sind daher für ihr Überleben und ihre Proliferation auf eine externe Arginin-Supplementierung durch Medien angewiesen.

Behandeln Sie anschließend die Zellen mit Arginin-Deiminase oder ADI. ADI hydrolysiert freies Arginin in den Medien, was zu einem Argininmangel führt. In der Folge sind die Zellen metabolischem Stress ausgesetzt, der intern eine autophagische Reaktion auslöst. Behandeln Sie gleichzeitig die Zellen mit einem roten Fluoreszenzfarbstoff, der Lysosomen in den Zellen markiert.

Während der Autophagie lagern sich becherförmige membranöse Strukturen, sogenannte Phagophore, um die geschädigten zytoplasmatischen Komponenten an. Schließlich de