Phosphopeptid-Anreicherung: Eine Antikörper-basierte Immunpräzipitationstechnik zur Trennung spezifischer phosphorylierter Peptide aus komplexen Peptidmischungen

Durch die Phosphorylierung spezifischer Aminosäurereste wie Tyrosin werden Phosphopeptide erzeugt, die eine entscheidende Rolle bei der Regulierung mehrerer zellulärer Signalwege spielen. Ihre Untersuchung ermöglicht die Identifizierung potenzieller Biomarker für die Krebstherapie.

Um Phosphopeptide zu isolieren, beginnen Sie mit einem lyophilisierten Pulver aus gereinigten Peptidverdauen, die aus Krebsgewebe extrahiert wurden. Das Pulver wird in einem geeigneten Puffer resuspendiert, um eine gleichmäßige Peptidsuspension herzustellen. Halten Sie einen neutralen pH-Wert aufrecht, um die Peptidstabilität zu gewährleisten.

Bereiten Sie eine Aufschlämmung vor, die aus Hydrogelkügelchen besteht, die an spezifische Anti-Phosphopeptid-Antikörper im gewünschten Puffer konjugiert sind. Geben Sie die Bead-Aufschlämmung in die Peptidsuspension. Die auf den Kügelchen immobilisierten Antikörper erkennen und binden an ihre spezifischen phosphorylierten Aminosäurereste innerhalb der Phosphopeptide und bilden Komplexe.

Zentrifugieren Sie die Mischung, um die Phosphopeptid-Kügelchen-Komplexe im Pellet zu sammeln. Entfernen Sie den Überstand, der ungebundene Peptide oder unspezifische Phosphopeptid