Titandioxid-basierte Anreicherung von Phosphopeptiden: Ein Verfahren zur selektiven Isolierung von Phosphopeptiden aus der Peptidbibliothek

Phosphopeptide sind kurze Aminosäurestrings, die phosphorylierte Serin-, Threonin- oder Tyrosinreste enthalten. Um Phosphopeptide aus einer Peptidmischung zu isolieren, beginnen Sie mit der Einnahme von Titandioxidkügelchen in einem Röhrchen. Äquilibrieren zur Konditionierung der Kügelchen unter Verwendung eines geeigneten angesäuerten Bindungspuffers, der ein Abschreckungsmittel enthält. Geben Sie die gewünschte Konzentration der Peptidmischung in die Bead-Aufschlämmung.

Inkubieren Sie die Mischung unter ständigem Schütteln, um zu verhindern, dass sich die Kügelchen absetzen. Der saure Zustand fördert die Phosphatgruppe der Phosphopeptide, um Koordinatenbindungen mit Titankügelchen zu bilden. Das Quenchmittel im Puffer reduziert jede unspezifische Bindung von nicht-phosphorylierten Peptiden an die Beads, so dass sie in der Suspension verbleiben.

Zentrifugieren Sie, um die Phosphopeptid-gebundenen Kügelchen zu pelletieren, während die nicht phosphorylierten Peptide im Überstand verbleiben. Entsorgen Sie den Überstand. Übertragen Sie die Phosphopeptid-gebundenen Kügelchen in eine vormontierte Spin-Filtersäule. Zentrifuge, um den Bindungspuffer zu entfernen und die Phosphopeptid-konj