Spaltung von Sphäroiden für die Subkultur und den Versand: Ein Verfahren zur Vermehrung und Übertragung von Sphäroiden aus neuroendokrinen Dünndarmtumoren

Sphäroide sind in vitro Kulturen von Zellen, die sich selbst zu dreidimensionalen Kugelstrukturen zusammengeballt haben. Zur Vermehrung von Tumorsphäroiden beginnen Sie mit Sphäroiden, die in einer geeigneten extrazellulären Matrix (ECM) kultiviert werden, die in einer Kulturplatte enthalten ist.

Triturieren Sie mit einer Mikropipette, um die ECM mechanisch zu brechen und die Sphäroide zu lösen. Übertragen Sie das Sphäro-ECM-Gemisch in ein Mikrozentrifugenröhrchen.

Zentrifugieren Sie bei niedriger Drehzahl, um die Sphäroide zu pelletieren und von der ECM im Überstand zu trennen. Entsorgen Sie den verbrauchten EZM-haltigen Überstand. Übertragen Sie das Röhrchen mit dem Sphäroid-Pellet auf Eis, um eine Verfestigung der ECM in den nachfolgenden Schritten zu verhindern.

Ergänzen Sie das Pellet mit frischem verflüssigtem ECM. Für die Subkultivierung mischen Sie den Inhalt, indem Sie wiederholt auf und ab pipettieren, um die Sphäroidzellen zu dissoziieren und in Suspension freizusetzen.

Diese Mischung mit sphäroidbildenden Zellen und EZM wird in eine frische Kulturschale ausgesät. Die EZM verfestigt sich und ermöglicht den Einschluss von Tumorzellen. Fügen Sie das gewünschte Wachstumsmed