Vitrifikationsbasierte Kryokonservierung: eine ultraschnelle Kühltechnik zur Konservierung biologischer Proben bei sehr niedrigen Temperaturen für die Langzeitlagerung
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Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:24 Min. • April 30th, 2023
Die Vitrifikation, eine ultraschnelle Kryokonservierungstechnik, ermöglicht es, lebende Zellen und Gewebe zu kühlen und sehr lange bei extrem niedrigen Temperaturen zu lagern.
Um ein frisch entnommenes Tumorgewebe zu vitrifizieren, nehmen Sie das Gewebe zunächst auf eine Kulturplatte. Entfernen Sie alle nekrotischen Regionen, fetthaltigen Regionen oder Blutgerinnsel aus dem Tumor. Waschen Sie das Taschentuch, um Blutspuren zu entfernen.
Schneiden Sie das Taschentuch in Scheiben mit angemessener Dicke. Übertragen Sie nun die Scheiben in ein Röhrchen mit einer Vitrifikationslösung, die aus DMSO oder Dimethylsulfoxid und Saccharose besteht. Diese Bestandteile wirken als Kryoprotektiva, um die Zellen vor Frostschäden zu schützen.
Bei niedriger Temperatur inkubieren. DMSO, ein zelldurchdringendes Kryoprotektivum, diffundiert über die Zellmembran und ersetzt Wasser in den Zellen, um die Bildung intrazellulärer Eiskristalle zu verhindern. Gleichzeitig wirkt Saccharose, ein nicht durchdringendes Kryoprotektivum, extrazellulär, indem es die Dehydrierung der Zellen erleichtert und die Bildung intrazellulärer Eiskristalle reduziert, um das Risiko des Zelltods zu verringern.
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