Fluoreszenzmikroskopie von neutrophilen extrazellulären Fallen oder NETs: Eine Technik zur Beobachtung der adhäsiven Interaktion zwischen Krebszellen und NETs

Unter pathologischen Bedingungen wie Krebs setzen aktivierte Neutrophile extrazelluläre Fallen oder NETs frei - ein Geflecht aus extrazellulärer DNA mit assoziierten Enzymen und antimikrobiellen Proteinen -, die zirkulierende Krebszellen einschließen.

Um die adhäsive Interaktion zwischen NETs und Tumorzellen in vitro sichtbar zu machen, beginnen Sie mit der Kultivierung von Neutrophilen niedriger Dichte, einem Neutrophilen-Subtyp, in einer polymerbeschichteten Kulturschale, die die Zellanhaftung fördert. Inkubieren Sie einige Stunden lang, um die Neutrophilen zur Bildung netzartiger NETs anzuregen.

Geben Sie eine Suspension von roten Fluorescein-markierten Krebszellen in die Neutrophilenkultur. Inkubieren Sie die Krebszellen für einen kurzen Zeitraum mit NETs, um die Interaktion zwischen Krebszellen und -NET zu erleichtern. Die NET-DNA wirkt als chemotaktischer Faktor, der Krebszellen anlockt und ihre Adhäsion an NETs fördert.

Entfernen Sie das verbrauchte Medium. Waschen Sie die Kultur vorsichtig mit einem geeigneten frischen Medium, um alle nicht anhaftenden Tumorzellen aus der Kulturvertiefung zu entfernen.

Fügen Sie nun einen membranundurchlässigen, grün fluoreszierenden Kernfl