Snap Freezing von Muskelgewebe für das Schneiden: Ein Protokoll zur Gewinnung ultradünner Schnitte von schnell eingefrorenem Mausmuskelgewebe

Das

Schockfrosten ist eine Technik, bei der Gewebeproben schnell auf ultrakalte Temperaturen eingefroren werden. Es hilft, die native Struktur von DNA, RNA und Proteinen im Gewebe zu erhalten.

Um den Gliedmaßenmuskel einzufrieren, beginnen Sie damit, frisch entnommenes Muskelgewebe aus der Hintergliedmaße einer Maus zu entnehmen.

Nehmen Sie dann flüssigen Stickstoff in eine Styroporbox und tauchen Sie ein Becherglas mit Isopentan - einer hochleitfähigen Flüssigkeit - in flüssigen Stickstoff.

Frieren Sie das Isopentan ein, bis die Lösung zähflüssig wird. Tragen Sie gleichzeitig einen Tropfen flüssiges Gefriermittel auf ein Korkstück auf.

Positionieren Sie das Muskelgewebe der Hintergliedmaßen, indem Sie die Sehne festhalten, und betten Sie das Gewebestück senkrecht in das flüssige Gefriermedium ein. Diese Orientierung hilft bei der anschließenden Bestimmung der Querschnittsfläche des Muskels.

Tauchen Sie das Korkstück mit anhaftendem Muskelgewebe kurz in das vorgekühlte Isopentanbad. Dies hilft beim schnellen und gleichmäßigen Einfrieren von Muskelgewebe.

Das Gefriermedium verfestigt sich bei niedriger Temperatur und bildet eine gallertartige Schicht um das Muskelgewebe, die es an O