Isolierung von metastasierten Krebszellkolonien aus Hühner-CAM: Ein Verfahren zur Isolierung von Krebszellen aus schalenlosen Eikulturen

Die Chorioallantoische Membran (CAM) des Huhns ist eine dreischichtige Membran, die sich direkt unter der Eierschale befindet. Es besteht aus einem äußeren Ektoderm, einem hochvaskulären Mesoderm und dem innersten Endoderm.

Das CAM-Mesoderm besteht aus Blutgefäßen, Fibroblasten und Stromakomponenten und bietet somit ein günstiges Umfeld für die Besiedlung von Tumorzellen.

Um kolonisierte Krebszellen aus CAM zu isolieren, beginnen Sie mit der Entnahme einer schalenlosen Eikultur, die mit fluoreszenzmarkierten Krebszellen in einer Schale vorinjiziert wurde. Visualisieren Sie die Eikultur unter einem Fluoreszenzmikroskop. Lokalisieren Sie die fluoreszierenden und kompakten metastasierenden Krebskolonien.

Schneiden Sie vorsichtig das CAM-Gewebe heraus, das metastasierende Kolonien von Interesse enthält. Übertragen Sie das exzidierte CAM-Gewebe in ein Mikrozentrifugenröhrchen. Zerkleinern Sie das Gewebe in kleine Stücke, um das CAM in den nachfolgenden Schritten für die enzymatische Behandlung zugänglich zu machen.

Ergänzen Sie das Röhrchen mit Kollagenase-Enzym und inkubieren Sie. Kollagenase baut das Kollagenprotein im CAM-Mesoderm ab und leitet die Dissoziation der Krebskolonie ein.