Isolierung und Kultivierung von murinen Zungenepithelzellen: Ein Verfahren zur Isolierung und Kultivierung von Zungenepithelzellen aus einem Mausmodell

Die Zunge besteht aus einem geschichteten Plattenepithel und einer darunter liegenden Schicht aus dichtem Bindegewebe, die als Lamina propria bezeichnet wird. Das Epithel besteht aus mehrschichtigen Plattenepithelzellen, die Schutz vor mechanischer Beanspruchung bieten.

Um Epithelzellen zu isolieren, beginnen Sie mit einer frisch geernteten Mauszunge. Zerkleinern Sie die Zunge, um kleinere Gewebefragmente zu erhalten. Behandeln Sie anschließend die Fragmente mit einem maßgeschneiderten Verdauungscocktail, der Kollagenase-, Hyaluronidase- und Desoxyribonuklease-Enzyme enthält.

Kollagenase- und Hyaluronidase-Enzyme verdauen die extrazelluläre Matrix, die das Gewebe zusammenhält, und fördern so die Freisetzung einzelner Zellen in die Suspension. Desoxyribonuklease baut jegliche freie DNA ab, die aus lysierten Zellen freigesetzt wird.

Geben Sie der verdauten Probe serumhaltigen Puffer, um die proteinhydrolysierenden Enzyme zu inaktivieren. Filtrieren Sie nun die Probe durch Zellsiebe, um unverdaute Gewebefragmente und Ablagerungen zu entfernen und eine Einzelzellsuspension von Epithelzellen zu erhalten.

Zentrifugieren, um die Zellen zu trennen. Den Überstand mit der Aufschlussmischung